一测多评法测定甘草中6种成分的含量.docxVIP

一测多评法测定甘草中6种成分的含量 “一次测量和多评估”使用一个对照品，同时测量不同的成分。对于一些制备困难或昂贵的对照产品，它们具有实际应用价值。例如，四种生姜酚类成分的含量测定、阴阳a型、阴阳c型、阴阳c型、阴阳a型、阴阳c型、阴阳、绿草素含量测定、辅助骨脂素异质异体脂素、辅助骨脂素和辅助骨脂乙素的含量测定。甘草含有黄酮类、三萜类、多糖等有效成分, 目前已有测定其所含2~5种化学成分含量的报道。本实验采用“一测多评”法, 以甘草酸对照品为内标物, 同时测定10批甘草药材中甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A和甘草次酸5种成分的含量, 并与外标法实测值进行比较, 为甘草的含量测定提供一种可供选择的新方法。 1 托利多公司托利多公司 2487型高效液相色谱仪 (美国Waters公司) , 1100系列高效液相系统 (美国Agilent公司) , AL-204型电子分析天平、AE240型1/10万电子天平 (瑞士梅特勒-托利多公司) 。10批甘草药材 (甘肃中药材公司, 经甘肃省食品药品检验所宋平顺主任药师鉴定为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的根或根茎) , 甘草苷、甘草酸铵、甘草次酸对照品 (均购自中国食品药品检定研究院, 批号分别为111610-201005, 110731-200615, 110723-200612) , 甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A对照品 (均由天津马克生物技术有限公司提供, 批号依次为FB-31001, FB-31002, LG025, 纯度均98.5%) , 乙腈为色谱纯, 水为重蒸馏水, 其他试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 检测波长和温度 Agilent XDB-C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm, 5μm) , 流动相乙腈 (A) -0.1%磷酸水溶液 (B) 梯度洗脱 (0~20 min, 90%~68%B;20~45min, 68%~30%B;45~75 min, 30%~5%B) , 流速1.0 m L·min-1, 柱温室温, 进样10μL, 检测波长 (0 min, 275 nm;32 min, 250 nm;33.5 min, 300 nm;34.5 min, 360 nm;53 min, 280 nm;55 min, 270 nm;57.5 min, 265 nm) , 见图1。 2.2 混合对照品溶液 依次精密称取甘草苷、甘草素、甘草酸铵、异甘草素、甘草查尔酮A和甘草次酸2.52, 3.10, 4.90, 3.83, 2.99, 4.23 mg, 置于25 m L量瓶中, 加70%乙醇定容至刻度, 即得混合对照品溶液。 2.3 超声处理法 精密称取甘草药材粉碎 (过三号筛) 约0.1 g, 精密加入70%乙醇25 m L, 称定质量, 超声处理40 min, 放冷, 密塞, 称定质量, 用70%乙醇补足减失的质量, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 经0.45μm微孔滤膜滤过, 即得。 2.4 方法研究 2.4.1 仪器精密度试验 精密量取同一供试品溶液, 按2.1项下色谱条件连续进样5次, 结果甘草苷、甘草素、甘草酸铵、异甘草素、甘草查尔酮A和甘草次酸相对峰面积的RSD均3.0%, 表明仪器精密度良好。 2.4.2 甘草苷、甘草、甘草、异甘草素、甘草查尔酮a和甘草次酸相对峰面积的rsd 精密量取同一供试品溶液5份, 按2.1项下色谱条件测定, 结果甘草苷、甘草素、甘草酸铵、异甘草素、甘草查尔酮A和甘草次酸相对峰面积的RSD在0.31%~2.7%。 2.4.3 稳定性试验 取同一供试品溶液, 分别在0, 3, 6, 9, 12, 15, 18 h进样, 按2.1项下色谱条件测定, 结果甘草苷、甘草素、甘草酸铵、异甘草素、甘草查尔酮A和甘草次酸峰面积的RSD在0.85%~3.4%, 表明供试品溶液在18 h内基本稳定。 2.4.4 加样回收率和rsd 精密称取已知含量的同批样品0.1 g (甘草苷、甘草素、甘草酸铵、异甘草素、甘草查尔酮A、甘草次酸质量分数分别为0.162 9%, 0.036 1%, 3.302 1%, 0.049 8%, 0.763 3%, 0.067 3%) , 共5份, 按6种成分的含量精密加入各对照品, 按2.3项下方法制备供试品溶液, 按2.1项下色谱条件测定, 计算各成分的平均回收率分别为99.78%, 100.66%, 101.84%, 98.64%, 100.64%, 102.44%, RSD分别为1.76%, 1.67%, 1.03%, 1.88%, 1.96%, 2.17%。 2.5 标准溶剂wk、am的检测 以甘草酸为内标, 按公式fk/m=fk/fm=Wk×Am/ (Wm×Ak) , 式中