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土壤有机提取物对小鼠肝、肾功能的影响 我国普遍水资源不足，农业生产缺水日益严重。许多农业国家不得不使用废水灌溉。目前,关于污水灌溉卫生问题的研究主要集中于对灌溉用水和土壤中重金属污染的研究[1.2],而对土壤有机物污染问题及其有机污染物的联合毒性研究甚少。在现行的GB 15618—1995《土壤质量环境标准》中,缺少特定有机污染物的卫生标准,更没有反映有机污染物综合毒性的指标,给土壤和农产品有机污染物的监督和监测带来不便,故急需尽早制定相关标准。笔者以污灌区土壤有机提取物对小鼠进行染毒,以了解有机污染物对实验动物肝肾功能的联合毒性,以期为修订和完善土壤质量标准提供毒理学依据。 1 材料和方法 1.1 分散剂、酸钠、二氧酸钠。提物为专门的《天津化学试剂》2 KQ-500VDB型超声振荡器(中国昆山超声仪器厂),K-D浓缩器。丙酮、石油醚、环己烷、硅胶、无水硫酸钠均为分析纯,购自天津化学试剂厂。肝、肾功能指标试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。 1.2 样品的采集和处理 1.2.1 选择发酵农田的土壤 于2007年5月,选取某污灌农田的土壤作为研究对象,灌溉水质为劣Ⅴ类;选取远离污灌区、采用地下水(水质符合GB 5749—2006《生活饮用水卫生标准》)灌溉农田的土壤作为对照。按照HJ/T 166—2004《土壤环境监测技术规范》的要求,采用梅花形布点采集样品,采集表层0～20 cm深的土样,采样量为1～2 kg。 1.2.2 提取有机物 将采集的土壤样品自然干燥,用木棒碾压,用玛瑙研钵将其研磨至全部通过40目尼龙筛。有机物的提取参照文献的方法进行。 1.3 小鼠的染毒实验 选择健康清洁级昆明种小鼠40只,体重为16～22 g,雌雄各半,由华北煤炭医学院实验动物中心提供,动物合格证号为:SCXK(豫)2005-0001。将小鼠按体重随机分为5组,分别为溶剂对照组(二甲亚砜)、对照区低剂量组、对照区高剂量组、污灌区低剂量组、污灌区高剂量组。高、低剂量组染毒剂量按土壤干重计分别为25、5 g/(kg·d)。采用灌胃方式进行染毒,每日1次,灌胃容量为5 ml/kg,连续染毒2周。染毒期间,动物可自由进食和饮水(自来水),以华北煤炭医学院实验动物中心配制的标准饲料喂饲,室温为18～22℃,相对湿度为45%～60%。 1.4 离心血清,分离血清 于第15天称重、处死动物,取静脉血,以1 500 r/min离心(r=15 cm)10 min,分离血清,备用。在冰浴中迅速分离小鼠的肝、肾组织,用生理盐水冲洗,准确称重,计算肝、肾组织的脏器系数。 1.5 肾功能指标检测 肝功能指标[谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、γ谷氨酰转肽酶(GGT)活力]和肾功能指标[尿酸(UA)、肌酐(Cr)、尿素氮(UN)含量]的测定均按试剂盒说明书的方法进行。 1.6 统计分析方法 所有数据以x±s表示。采用SAS 8.2软件包进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析(One Way ANOVA),组间两两比较采用SNK检验。以P0.05表示差异有统计学意义。 2 结果 2.1 对照区和污马克思主义经皮各剂量对肝脏和脏器重量的影响 表1可见,小鼠体重变化各组之间差异无统计学意义(P0.05)。 表2可见,与溶剂对照组比较,对照区和污灌区各剂量组的肝脏和肾脏重量及其脏器系数均降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。与对照区相同剂量组比较,污灌区高剂量组的肝脏系数和污灌区高、低剂量组的肾脏系数均降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。 2.2 对肝组织中alt、降血酸酶活性的影响 表3可见,与溶剂对照组比较,污灌区低剂量组肝组织中的GGT活力和高剂量组肝组织中的ALT、GGT活力均升高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。污灌区高剂量组肝组织中的GGT活力高于对照区高剂量组,差异有统计学意义(P0.01)。 2.3 各组肾组织中un及cr含量的比较 表4可见,与溶剂对照组比较,对照区高剂量组和污灌区高、低剂量组肾组织中的UN含量升高,污灌区高剂量组肾组织中Cr含量升高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01);污灌区高剂量组肾组织中的Cr含量高于对照区高剂量组,差异有统计学意义(P0.01)。 3 污灌溉对肝组织中ast、alt活性的影响 有机污染物进入动物体内可对动物产生毒性,在动物体内肝脏是解毒器官,肾脏是排毒器官。本次研究结果显示,与溶剂对照组比较,对照区和污灌区各剂量组的肝脏和肾脏重量及其脏器系数均降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。与对照区相同剂量组比较,污灌区高剂量组的肝脏系数和污灌区高、低剂量组的肾脏系数均降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。说明土壤中有机污染物对肝、肾组织器官的发育有