人骨髓抑制因子1MPIF1CCL23ELISA试剂盒.docxVIP

中文名称：人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)ELISA试剂盒 英文名称：HumanMyeloidProgenitorInhibitoryFactor1,MPIF-1ELISAKit 规格：96T/48T 运输：2~8°保存运输 主要成分:酶标板,试剂,标准品等 性状：盒装液体 用途：科研与实验试剂，不得用于临床诊断。 自备物品: 酶标仪(450nm) 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 37℃恒温箱 自备的设备及试剂: 1. 450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热) 2. 单道或多道微量加液器及吸头 3. 稀释样品的EP管 4. 蒸馏水或去离子水 5. 吸水纸 6. 盛放洗液的容器 样品收集、处理及保存方法: 1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 操作流程如下: (1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。 (2)酶标板置4℃,包被过夜。 (3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。 (4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的抗体工作液50μl。 (5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。 (6)洗板,同(4)。 (7)每孔加1:5000稀释的抗体工作液 100μl。 (8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。 (9)洗板,同(4)。 (10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。 (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 (12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。 (13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。