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几种比色法测定南瓜中齐墩果酸的研究 黄瓜具有很高的食用和药用价值。俗话说“杏有益，梨有益，黄瓜有益”。中医认为，黄瓜具有舒筋活络、健脾健胃、舒肝止痛、驱风除湿的功效。据现代医学研究，黄瓜中含有大量的水分。动物实验表明,齐墩果酸有消炎抑菌,降转氨酶作用。对四氯化碳引起的大鼠急性损伤有明显的保护作用,还有促进肝细胞再生、防止肝硬化、强心、利尿、升白、降血脂、降血糖、增强有机体免疫功能、抑制变态反应等作用。 齐墩果酸是五环二萜类化合物,分子式为C30H48O3,是木瓜的主要药效成分。纯品齐墩果酸为白色针状结晶,熔点为308～310 ℃,比旋度[a]20D=+73.3°(C=0.15,CHCl3),不溶于水,可溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。齐墩果酸在有些植物中主要以单体形式存在,在另一些植物中则主要以皂甙形式存在。有关资料表明,木瓜中齐墩果酸以单体形式存在,通过实验(不经水解就可得到齐墩果酸和直接用水提取得不到齐墩果酸)也证明了这一点,齐墩果酸可与多种显色剂发生显色反应,从而可进行比色测定,本实验先对其显色剂显色效果进行了探讨,然后选定香草醛-高氯酸试剂为显色剂,再对各种实验条件进行了比较,找到了最佳测定条件。 1 机器和材料 1.1 实验室主要设备 752-C型紫外分光光度计(上海第三分析仪器厂),电热恒温水浴锅(江苏省医疗器械厂),CS101-Ⅰ型电热鼓风干燥箱(重庆试验设备厂),LXJ-Ⅱ离心沉淀机(上海医用分析仪器厂),分析天平(上海天平仪器厂),微量进样器(宁波市镇海玻璃仪器厂),硅胶连续层析柱(自制),粉碎机等均为实验室常用设备。 1.2 实验室试剂 齐墩果酸样品(西南师大出品),木瓜片(遵义市中瓜绿色食品开发有限责任公司提供,使用时用粉碎机粉碎),高氯酸,香草醛,磷钼酸等均为分析纯,其余均为实验室常用试剂。 2 实验方法 2.1 齐墩羧酸-香草醛-硫酸试剂显色剂的确定 据王慕邹、高凤英等(1978),陈明珠(1981)报道,皂甙、皂甙元及甾类成分遇香草醛-硫酸,醋酐-浓硫酸,氯仿-浓硫酸,三氯乙酸,冰醋酸-乙酰氯,对羟基苯甲醛-硫酸,香草醛-高氯酸,间二硝基苯等试剂均发生显色反应。陈友梅(1988)对此做了较详细的整理,报道了十多种此方面的显色剂,但显色机理尚需进一步研究。 据初步实验,齐墩果酸与香草醛-高氯酸试剂、香草醛-硫酸试剂发生显色反应已被证实,均呈现紫色。相同齐墩果酸浓度下,香草醛-硫酸试剂显色较深,但很不稳定,放置时间越久,吸光度越大,其中的机理不详,待今后进一步研究探讨,但有一点是肯定的,齐墩果酸的浓度与吸光度确实存在一定的线性关系,只要确定好合适的实验条件,将很好地符合郎白-比尔定律,因此可以进行比色测定,以下比色测定部分将按此方向进行详细探讨。 香草醛-冰醋酸溶液为无色液体,高氯酸也是无色液体,两者混合还是无色,再加入乙酸乙酯仍为无色,这样试剂空白效果很好,在未稀释前,齐墩果酸显色均较深,但一经稀释后,颜色深浅差别就比较明显,可见齐墩果酸浓度与其吸光度之间有一定的线性关系,因此可以用香草醛-高氯酸试剂为显色剂进行比色测定。 2.2 测量前的准备 2.2.1 玻璃板活化 称取硅胶G 50 g,放入研钵中,加入水60 ml,调成糊状,倒在已洗净擦干的玻璃板(25 cm×5 cm)上用手摇晃,使其表面均匀光滑,于室温下晾干后,置于烘箱内加热活化,在温度105 ℃左右保持活化30 min,然后放入干燥箱中保存,待用。 2.2.2 齐墩羧酸乙醇溶液的配制 将齐墩果酸样品用95%乙醇重结晶3次,得细针状结晶,在105 ℃干燥至恒重,精密称取10 mg,以无水乙醇为溶剂,配制成50 ml浓度为200 μg/ml的齐墩果酸乙醇溶液。点样10 μl于硅胶G板上,以氯仿∶丙酮(10∶1)为展开剂展开,取出,挥去溶剂,喷以5%磷钼酸乙醇溶液,在105 ℃烘约5 min,只呈现一个蓝色斑点,故可将所配制的齐墩果酸乙醇溶液定为标准液。 2.2.3 香草醇冰醋酸溶液的制备 精密快速称取香草醛0.552 g,迅速用适量冰醋酸溶解并马上倒入10 ml的容量瓶中,迅速用冰醋酸稀释至刻度,以备当日之用。 2.2.4 党组织的渗捣 取一圆柱状玻璃筒,两头均空,垂直置于一漏斗之上,漏孔用棉花塞堵一下,然后插入软木塞置于接收瓶,塞紧,玻璃筒用铁架台固定,从上端先加入用适量95%乙醇浸泡的木瓜粗粉,再用滴液漏斗滴加95%乙醇溶液进行渗漉。 2.3 颜色试验条件的选择 2.3.1 试剂空白的测定 精密吸取齐墩果酸标准液0.5 ml(相当于100 μg齐墩果酸)数份,置具塞试管中,加热挥去溶剂,加入新制的5%香草醛-冰醋酸液不同量,再加入高氯酸0.8 ml摇匀,于70 ℃恒温水浴加热15 min,流水冷却至室温,再精密加入乙酸乙酯使全量为5 m