黄颡鱼低渗溶液中人工授精方法的比较.docxVIP

黄颡鱼低渗溶液中人工授精方法的比较 黄嘴鱼是中国水稻科鱼类中分布最广的小型经济鱼类。在市场需求的驱动下，它已发展成为一个全国性的育种品种，2010年的育种产量达到18.4万吨。小品种、大市场、高品质和高效益是黄颡鱼养殖的重要特色。目前,黄颡鱼种苗主要通过自然繁殖或人工繁殖方式获得,但要实现规模化、高效率的生产还面临诸多的技术因素,其中受精率的稳定性是影响种苗繁殖生产的最重要因素。鉴于此,笔者等在人工繁殖实践中专门配置了一种低渗溶液,在低渗溶液中进行人工授精,大大提高了受精率。本试验通过2种授精方法、6个浓度的低渗溶液进行人工授精,比较精子活力、受精率和孵化率,以期提高人工授精条件的可控性,为黄颡鱼规模化人工繁殖生产提供参考。 1 材料和方法 1.1 黄铋鱼的放养 试验鱼为2011年6月从射阳河收集、在康余公司养殖基地驯养1年的2冬龄以上黄颡鱼。试验时雌鱼均重(137.6±4.2)g,成熟系数(18.7±3.1)%,雄鱼均重(274.8±3.6)g。 1.2 不同浓度的低渗溶液,根据推动精子活力和提高人工授精能力的测定,分 试验用低渗溶液以NaCl和KCl为主要成分配制。NaCl和KCl按3∶1的比例,用蒸馏水配制成浓度分别为0%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%和0.5%的6种低渗溶液。在每种低渗溶液中观察精子的活力和比较人工授精的效果。每个试验重复3次,试验期间的温度(27±1)℃。 1.3 测试方法 1.3.1 精盐储存溶液的制备 精子保存液参照文献的配方配制,4 ℃冷藏待用。 1.3.2 精子稀释液的制备 将注射激素发情后的雄鱼剪断下颌处的静脉,放血2 min,取出精巢在精子稀释液中洗去血污和脂肪,放到120目的筛绢挤出精液,用精子保存液按1∶4稀释,在4 ℃保存待用。 1.3.3 精子被激活的实验方法:基于数码显微法测量精子在低渗溶液中的运动轨迹见表1,根据拍摄精子运动情况,将精子在各种低渗溶液中 利用注射器针尖挑取少量的精液,放到事先滴加好低渗溶液的载玻片上,激活精子,在数码显微镜下拍摄出精子在各种低渗溶液中的运动状况,根据拍摄的影像统计精子运动时间和精子被激活的数量。精子的激活率、强烈运动期、慢速运动期和寿命的观察参照文献中的方法。 1.3.4 精子的采集和利用 人工催情采用两针注射,时间间距为14 h。第一针注射剂量为LRH-A215 μg/kg,第二针为LRH-A215 μg/kg、DOM 3.5 mg/kg和HCG 1 000 IU/kg。到达效应时间后,先取雄鱼采用1.3.2方法采精,采集的精液用精子保存液作1∶20稀释待用。其后取雌鱼,将体表水擦干,将成熟卵挤入不锈钢盆中供人工授精试验使用。2012年7月2日-5日在公司养殖基地连续开展了3批黄颡鱼的催产试验,每批催产雌鱼400尾、雄鱼2尾。 1.3.5 精制液的制备 试验采用2种人工授精方法。第一种方法采用卵子和精子同步激活的受精方法,即取500 g卵子加入经精子保存液稀释的精液2 mL混合均匀,再加入750 mL的低渗溶液,搅拌40 s完成受精。第二种方法采用预激活精子的受精方法,即取750 mL的低渗溶液,加入经精子保存液稀释的精液2 mL,搅拌3～5 s激活精子,再将混合液加入到500 g卵子中搅拌40 s完成受精。每500 g卵子为一个人工授精批次,作为试验的一个重复。 1.3.6 激活精子试验 为考察人工授精时间对受精率的影响,试验设计了2组延时人工授精的对比试验,低渗溶液浓度分别采用0%和0.3%两种。第一组试验:卵子加入低渗溶液分别激活10 s和20 s后,再加入精子完成人工授精;第二组试验:与第一组试验相反,激活精子10 s和20 s后再倒入卵子中完成人工授精。对照不延时,人工授精的操作方法采用1.3.5的第二种方法。 1.3.7 将hp、n、pb进行孵化 采用脱粘孵化的方式。人工授精后的卵子用8%浓度的黄泥浆悬浊液脱粘5 min,然后放入容积约15 L的孵化桶中流水孵化,并在孵化桶的锥形底部安装一个直径10 cm的圆形纳米管充气,水流和气幕的流量控制在能将卵子均匀翻动。受精卵在原肠中期时统计受精率,脱膜2 h后用重量法计算出苗数。 1.4 数据计数 试验数据在Excel表中处理分析,并作T检验,显著水平为P0.05。 2 结果 2.1 精子慢速运动时间和平均寿命比较 不同浓度低渗溶液对精子活力和寿命影响的观察结果列于表1。结果显示,低渗溶液能不同程度地提高精子的活力与寿命。各试验组的精子强烈运动时间显著高于对照组,以0.3%浓度组和0.4%浓度组最高,分别达到了(34.7±0.58)s和(35.0±1.00)s,比对照组延长了近11 s;而精子慢速运动时间和平均寿命以0.2%浓度组和0.3%浓度组为最高,其次是0.4%浓度组,都