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一例鸡前列腺增生模型的治疗 乌乌凤丸是中医经典的妇科药物，具有益气健血、调经止痛的功效。全方由乌鸡、熟地黄、鹿角胶、鳖甲、牡蛎、人参、黄芪、当归、香附、川芎等20味中药组成,集温补、滋阴、涩敛、调和为一方,具有补而不滞,温而不燥的特点,为著名理血通经药,为扶正祛邪之剂。临床常用于气血两虚、身体瘦弱、腰膝酸软、月经不调、崩漏带下等症的治疗,疗效确切。现代药理研究证明,乌鸡白凤丸具有补血、凝血、抗炎、镇痛、保肝、增强免疫、性激素样作用以及促皮质激素样作用等。前列腺增生是中老年男性常见病,在60岁以上男性中前列腺总体积增大的比例超过50%,而在85岁以上男性中,前列腺总体积增大高达90%,并逐渐趋于低龄化。目前前列腺增生治疗方法颇为庞杂,不外药物和手术两种,手术疗效较为可靠,但术后会产生许多并发症和后遗症,患者依从性不理想;药物治疗前列腺增生时间较长,需长期用药,西药的不良反应较多、疗效不稳、费用高等,常受到很多限制。中医药防治前列腺增生症具有疗效确切、毒副作用小、从整体调节及改善病情等优势。笔者的前期研究表明,常用妇科用药对前列腺增生有明确的疗效,本文观察乌鸡白凤丸对小鼠前列腺增生模型的影响。 1 材料表面 1.1 注射用激素钠原酯类 乌鸡白凤丸,江西半边天药业有限公司,批号081202;戊巴比妥钠,中国医药集团上海化学试剂公司,批号注射用青霉素钠,华北制药股份有限公司,批号C0812302;丙酸睾酮注射液,上海通用药业股份有限公司,批号071001;癃闭舒胶囊,石家庄科迪药业有限公司,批号080413;小鼠睾酮(T)ELISA检测试剂盒,北京科美东雅生物技术有限公司,批小鼠雌二醇(E2)ELISA检测试剂盒,北京科美东雅生物技术有限公司,批 1.2 动物 1.3 高速冷冻离心液tgl-3g FA(N)/JA(N)系列电子天平,上海民桥精密仪器有限公司;TGL-16G高速冷冻离心机,上海安亭科学仪器厂;电动匀浆机,宁波新芝生物科技股份有限公司;Sn-895B型智能放免γ测量仪:上海原子核研究所四环仪器一厂。 2 方法 2.1 小鼠胰腺微核试验 取体重20~23 g雄性小鼠80只,随机取10只作为空白对照组,做假手术处理;其余小鼠造前列腺增生模型,小鼠称重后腹腔注射2%戊巴比妥钠(30 mg·kg-1)麻醉,常规消毒皮肤,于无菌条件下经阴囊摘除双侧睾丸,残端处结扎,缝合皮肤,肌内注射青霉素20万u·kg-1;手术后第3天,取去势成功、状态良好的小鼠50只,随机分为5组用于造前列腺增生模型;造模型5组均每日sc丙酸睾酮5 mg·kg-1(溶于大豆油),连续3周,空白组注射等量溶媒;于造模型第1天,造模型5组分别ig乌鸡白凤丸高、中、低剂量混悬液(9,4.5,2.25 g·kg-1),癃闭舒胶囊混悬液(0.45 g·kg-1)及同体积的生理盐水,给药体积均为20 m L·kg-1;空白对照组灌服同体积的生理盐水;每日给药1次,连续给药3周。于末次给药后2 h(禁食不禁水12 h),小鼠称重后眼眶取血,离心,分离血清,测血清中T,E2水平;然后脱颈椎处死小鼠,迅速取前列腺和胸腺组织,称前列腺湿质量,计算前列腺指数(前列腺指数=前列腺湿质量mg/小鼠体重g);将前列腺和胸腺于10%甲醛溶液中固定,石蜡包埋,切片,HE染色,光镜下观察各组前列腺和胸腺组织的形态,胸腺皮质厚度及淋巴细胞数的变化,对各组小鼠前列腺腺体进行立体计量学测定,测定腺体的体密度(Vv)。 2.2 指标测定 2.2.1 检测抗体的制备 用小鼠T ELISA检测试剂盒测定血清中T的含量:试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA),往预先包被T抗体的包被微孔中,依次加入标本、对照品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的T呈正相关。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(A),计算样品浓度,即得到小鼠血清中T的含量。 2.2.2 选择抗菌剂的制备 用小鼠E2ELISA检测试剂盒测定血清中雌二醇的含量:试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA),往预先包被E2抗体的包被微孔中,依次加入标本、对照品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的E2呈正相关。用酶标仪在450 nm波长下测定A,计算样品浓度,即得到小鼠血清中E2的含量。 2.2.3 前列腺腺体的体密度测量 采用通用立体计量学测定方法,应用测试格点分析法,计算腺体上的交叉点数与参照系中的交叉点数的百分比,为该组织中腺