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hplc法测定西南不同主产地生姜中6-姜酚的含量 中国西南部有许多山区，气候湿润，全年高，地理环境适宜。对生姜有害，有利于生长，品质优良。主要成分是姜酚。在医学上, 生姜是重要的中药材, 它是卫生部首批公布的药食兼用资源之一。姜酚是姜中辣味成分的主要组分之一, 现代医学研究证实, 姜酚具有很强的生物活性和药理作用, 其具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、消炎、强心、降压、防治心血管疾病、健胃与抗胃溃疡、保肝利胆、防腐杀虫等广泛的生物活性。6-姜酚为姜酚中最主要的活性成分, 其可以治疗皮肤癌, 抑制恶性细胞增生。研究表明生姜的保健特性和药食兼用特性大部分都与6-姜酚有直接或间接的关系, 通过建立HPLC方法来准确测定西南各主要产地生姜中6-姜酚含量, 为生姜在医药保健方面的应用提供依据。 1 主要设备和材料 1.1 超声、仪器和干燥配方测量d分离器dq-25d 高效液相, 型号:Aglient 1260型, VWD检测器;超声, 型号:KQ-250DB, 昆山市超声仪器有限公司;真空干燥, 型号:BZF50型, Boxun;电子天平, 型号:METTLER TOLEDO。 1.2 -姜酚对照品 生姜:在西南地区云、贵、川三省相关产地购买;6-姜酚对照品:购买自天津中新药业, 纯度98% (HPLC) ;水:二次蒸馏水;其余试剂均为分析纯。 2 实验部分 2.16 -姜酚含量测定 2.1.1 水、温度和塔板数 色谱柱:Diamonsil C18(5μm, 4.6×250 mm) ;流动相:乙腈∶水=66∶34;柱温:30℃;流速:1.0m L/min;波长:280 nm;进样量:10μL。理论塔板数以6-姜酚计, 大于35000。结果如图1所示, 对照品 (A) 及样品 (B) 基线平直, 峰形对称尖锐, 无拖尾, 显示在此条件下样品组分分离效果良好。 2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取6-姜酚对照品15.44 mg至25 m L容量瓶中, 甲醇超声溶解, 定容后作为对照储备液。根据实验要求, 用甲醇稀释成5个不同浓度水平的系列对照品溶液, 置于4℃冰箱避光保存。 分别精密称取粗姜酚7.94 mg、8.01 mg、15.02mg、17.21 mg和26.00 mg至10 m L容量瓶中, 甲醇超声溶解, 定容后置于4℃冰箱避光保存。 2.1.3 标准曲线的绘制 将6个不同浓度水平6-姜酚对照品溶液依次连续进样3次取平均值, 浓度为横坐标X, 峰面积值为纵坐标Y, 绘制标准曲线如图2, 计算回归方程, R值。 标准曲线回归方程为Y=6246.5X+4.4, R=0.999962。6-姜酚浓度在0.06176-0.37056mg/m L范围内, 6-姜酚浓度与峰面积的线性关系良好。 2.1.4 进样和进样次数 配制低、中、高三种浓度分别是0.067、0.154、0.344 mg/m L的6-姜酚标准品溶液, 在一天之内分别连续进样5次, 以及连续5天分别进样1次, 检测6-姜酚的峰面积, 日内、日间RSD值分别是0.11%、0.19%。 2.1.5 进样和日内、持续时间进样6-姜酚含量 精密吸取浓度为0.801 mg/m L的供试品溶液, 分别间隔0、1、2、4、8、16、24小时进样1次测定6-姜酚含量, 以及分别间隔1、3、6、10、15、30天进样1次测定6-姜酚含量, 日内、日间RSD值分别是0.48%、1.00%。 2.1.6 重复 精密吸取5份不同浓度水平供试品溶液, 测定6-姜酚的含量, RSD值为0.87%。 2.1.7 最低浓度ms 空白溶剂甲醇峰高0.12 m Au, 0.067 mg/m L6-姜酚标准品的峰高52.5 m Au。信噪比3∶1, 6-姜酚能被检测出的最低浓度为4.59×10-4mg/m L。 空白溶剂甲醇峰高0.12 m Au, 0.067 mg/m L6-姜酚标准品的峰高52.5 m Au。信噪比10∶1, 6-姜酚能被检测出的最低浓度为1.53×10-3mg/m L。 2.1.8 加样回收率试验 取6-姜酚含量为41.13%的粗姜酚不同质量5份, 精密称定, 分别加入6-姜酚标准品0.344 mg, 配制待测样品溶液, 测定6-姜酚含量, 计算加样回收率, RSD值为1.21%。 2.1.9 -姜酚质量分数的计算 样品溶液进样10μL, 按“2.1.1”色谱条件进行HPLC测定6-姜酚含量, 按以下公式计算。 c为进样时样品浓度, mg/m L;A为样品中6-姜酚所对应的的峰面积, m Au·s; W6-姜酚为样品中6-姜酚的质量分数;x为稀释倍数;v为进样溶液总体积, m L;m为样品质量, mg。 2.2 生姜是中国西南部的主要药物 2.2.1 小麦粉的制备 将不同品种的生姜分别洗净切片, 恒