高中生物人教版课件：生物高考复习第34讲动物细胞工程.pptx

生物技术与工程2023高考一轮复习把握高考命题走向，练习和测试中夯实基础、提升能力第34讲 细胞工程—动物细胞工程 动物细胞培养、动物细胞融合和单克隆抗体技术 通过核酸检测可以判断是否感染感染新冠病毒（SARS-CoV-2），能够及早检测到处于窗口期的感染者，是新型冠状病毒肺炎患者诊断的“金标准”。但是，与抗体抗原检测相比，基于聚合酶链反应 (Polymerase Chain Reaction, PCR) 技术耗时费力，且需要专业的技术实验人员操作特定的设备，不适用于居家诊断。核衣壳 (Nucleocapsid Protein, N) 蛋白是SARS-CoV-2 基因组编码最丰富、高度保守的结构蛋白，是作为抗原检测中较为理想的靶点。因此，制备检测SARS-CoV-2(N) 蛋白抗原需要的单克隆抗体 (Monoclonal Antibody, mAb)，建立 SARS-CoV-2(N) 蛋白抗原的检测方法，开发一款便捷的居家诊断、检测试剂盒，可避免人员的大量聚集和降低交叉感染的风险，可减少社会资源的投入。问题探究，体系建构 【任务】请写出制备检测SARS-CoV-2(N) 蛋白抗原需要的单克隆抗体的技术流程，梳理写出其中涉及的动物细胞培养、动物细胞融合的操作要点和原理。原理：（1）哺乳动物受到病原体（或抗原）刺激后，体内会形成能产生特定抗体的B淋巴细胞。多次免疫能产生更多的能产生特定抗体的B细胞。（2）一个B细胞只能产生一种特异性抗体。（3）抗体能与抗原特异性结合。（1）细胞膜具有流动性。（2）癌细胞能无限增殖，正常细胞的增殖是有限度的。1.免疫学原理：2.细胞学原理：技术：动物细胞培养、动物细胞融合 制备特定抗原蛋白：基因工程、纯化细胞融合并筛选杂交瘤细胞大规模培养杂交瘤细胞、提取单克隆抗体免疫小鼠、获取B淋巴细胞获取能产生所需抗体的杂交瘤细胞两次筛选： 第一次筛选获得杂交瘤细胞 第二次筛选获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞 单克隆抗体：第一次筛选获得杂交瘤细胞①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。筛选出杂交瘤细胞方法？B淋巴细胞及同型融合细胞不能无限增殖，死亡骨髓瘤细胞及同型融合细胞不能无限增殖，死亡杂交瘤细胞能无限增殖，生长培养基中加入氨基蝶呤（选择培养基）收集增殖的细胞知识拓展 知识拓展单克隆抗体：第二次筛选能产生特定抗体的杂交瘤细胞—抗原-抗体杂交法在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的目的和方法是不相同的。将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个细胞进行培养（克隆化培养）一段时间后，用荧光标记的抗原检测各孔上清液中细胞分泌的抗体上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔多孔细胞培养板抗体检测板分泌抗体能跟特定抗原结合的细胞即为所需杂交瘤细胞阳性孔进行多次克隆化培养和筛选，直到阳性率为100%后，得到大量能高效产生所需抗体的阳性杂交瘤细胞。 动物细胞培养的过程机械方法胰蛋白酶处理胶原蛋白酶处理动物组织块分散成单个细胞加培养液细胞悬液放入培养瓶在适宜条件在适宜条件分瓶培养原代培养传代培养将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经过处理后的初次培养称为原代培养。将分瓶后的细胞培养称为传代培养。营养物质：糖类、氨基酸、维生素、无机盐、血清等；适宜的PH、渗透压无菌无毒环境；适宜的气体环境：95%空气、5%CO2；适宜的温度①离心细胞分裂受阻①悬浮生长： ②贴壁生长：细胞密度过大，有害代谢物积累，营养物质缺乏接触抑制②胰蛋白酶处理成悬浮液后再离心 机体中能进行自我更新（产生与自身相同的子代细胞）并具有多向分化潜能（分化形成不同细胞类型）的一类细胞胚胎干细胞(ES细胞)：存在于早期胚胎中，具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能。也叫做全能干细胞。特点：体积小、 细胞核大、核仁明显。取自早期胚胎。成体干细胞：存在于成体组织或器官内中，包括骨髓中的造血干细胞，神经系统中的神经干细胞和睾丸中的精原干细胞。特点：只能分化成特定的细胞或组织诱导多能干细胞（iPS细胞）：干细胞的培养分类概念动物细胞培养技术的应用——动物细胞培养是动物细胞工程的基础。人造皮肤的构建、动物分泌蛋白的规模化生产、干细胞的培养等都需要动物细胞培养技术。 如：白血病、帕金森病、阿而茨海默病等移植取成纤维细胞等iPS细胞转入相关因子细胞发生转化分化胰岛细胞神经元血细胞肠上皮细胞心肌细胞肝细胞病人iPS细胞用于治疗人类疾病示意图诱导性多能干细胞病人取出成纤维细胞转入相关因子，细胞发生转化iPS细胞分化各种类型的细胞移植 单克隆抗体的应用单克隆抗体能准确地识别抗原的细微差异