高中生物人教版课件：基因工程的基本操作程序二提交课件dyml.pptx

第3章 第2节 基因工程的基本操作程序（二）年 级：高二年级 学 科：生物（人教版）主讲人：徐霄 学 校：南方中学 高二 | 生物第3章 第2节 基因工程的基本操作程序（二）年 级：高二年级 学 科：生物（人教版）主讲人：徐霄 学 校：南方中学 高二 | 生物与载体拼接 普通猕猴桃（无抗病特性）猕猴桃细胞抗溃疡病猕猴桃（有抗病特性）导入抗病基因重组DNA分子一.目的基因的筛选与获取二.基因表达载体的构建三.将目的基因导入受体细胞四.目的基因的 检测与鉴定培育转基因抗溃疡病猕猴桃的简要过程 高二 | 生物三、将目的基因导入受体细胞转化：指目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程。科学家应用“农杆菌转化法”将抗菌肽基因导入到猕猴桃的细胞中，并最终获得抗病猕猴桃。此处“转化”与肺炎链球菌转化实验中的“转化”含义相同，实质都是基因重组。阅读教材P81页的资料卡，了解农杆菌转化法的原理和基本过程 高二 | 生物1、农杆菌转化法三、将目的基因导入受体细胞①农杆菌能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。（可转移的DNA）②农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。原理 过程1、农杆菌转化法三、将目的基因导入受体细胞6目的基因Ti质粒表达载体农杆菌植物细胞植物细胞染色体DNA新性状植株构建转入导入插入表达 1、农杆菌转化法三、将目的基因导入受体细胞思考：1、农杆菌转化法中两次拼接、两次导入分别是？思考：2、农杆菌转化法中，目的基因是否就是T-DNA，如果不是，T-DNA与目的基因是什么关系？ T-DNA不是目的基因，但它将来会被整合到宿主细胞染色体的DNA上，只要将目的基因插入T-DNA中，目的基因就可以随T-DNA进入宿主细胞并整合到宿主细胞的染色体上。(1)两次拼接：第一次是将目的基因拼接到Ti质粒的T－DNA上； 第二次(非人工)指被插入目的基因的T－DNA拼接到受 体细胞染色体的DNA上。(2)两次导入：第一次是将含目的基因的重组Ti质粒导入农杆菌； 第二次(非人工)是指含目的基因的T－DNA导入受体细胞。 高二 | 生物2、花粉管通道法（我国独创）三、将目的基因导入受体细胞方法2：在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。方法1：用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中目的基因目的基因适用生物：开花植物 3、目的基因导入动物细胞三、将目的基因导入受体细胞（1）常用方法：（2）受体细胞:显微注射法受精卵①体积大，易操作。②易表现出全能性。（3) 过程：构建基因表达载体并提纯利用显微注射将基因表达载体注入动物的受精卵中早期胚胎培养胚胎移植获得具有新性状的动物 3、目的基因导入微生物三、将目的基因导入受体细胞（1）常用方法：Ca2+处理原核细胞（常选择大肠杆菌）目的：可使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。（2）受体细胞：优点：繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少，易于培养。Ca2+感受态细胞吸收 高二 | 生物小结：将目的基因导入受体细胞的方法种类项目植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法???受体细胞???转化过程目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→导入植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA中→表达目的基因表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物Ca2＋处理细胞→能吸收周围环境中DNA分子的生理状态细胞→重组的基因表达载体导入细胞中农杆菌转化法显微注射法Ca2＋处理法体细胞或受精卵受精卵原核细胞 高二 | 生物四、目的基因的检测与鉴定如何确定成功的获得了抗溃疡病的抗病猕猴桃？检测目的基因是否表达出相应的性状——是否具有抗病性状没有抗菌肽基因的猕猴桃有抗菌肽基因的猕猴桃感染致病菌表现出溃疡病病症未表现出溃疡病病症没有表达目的基因表达个体水平：检测是否具有抗性以及抗性程度 四、目的基因的检测与鉴定抗菌肽基因mRNA抗菌肽抗病猕猴桃PCR与核酸分子杂交技术检测抗原 — 抗体杂交技术分子水平抗性鉴定个体水平检查目的基因进入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性。 高二 | 生物四、目的基因的检测与鉴定（1）借助载体上的标记基因可以检测目的基因是否在受体细胞中稳定地存在并遗传（2）基因探针：一段带放射性标记的、与目的基因互补的特异核苷酸序列。可以