病理学疾病的病理学诊断和研究方法讲稿带习题答案.docxVIP

第十八章　疾病的病理学诊断和研究方法 学习目标 1.掌握　组织和细胞病理常规技术;常用组织化学和免疫组织化学技术基本操作和原理;原位PCR技术的原理及操作及核酸原位杂交技术的原理。 2.熟悉　电镜和显微切割技术;流式细胞技术。 3.了解　激光扫描共聚焦显微技术、图像分析技术、生物芯片、生物信息学技术及比较基因组杂交技术。 %e5%9b%be%e5%83%8f7528.JPG 第一节　大体、组织和细胞病理学技术 (一)大体观察 主要运用肉眼或辅以放大镜、量尺和磅秤等工具,对大体标本的病变性状(形状、大小、重量、色泽、质地、界限、表面及切面形态、与周围组织和器官的关系等)进行细致的剖检、观察、测量、取材和记录,必要时可摄影留作资料。大体观察是学习病理学的主要方法之一。 (二)组织病理学观察 将肉眼确定为病变的组织取材后,以福尔马林(formalin,甲醛)溶液固定和石蜡包埋制成切片,经不同的方法染色后用光学显微镜观察。通过分析、综合病变特点,做出疾病的病理诊断。组织切片最常用的染色方法是苏木素?伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色。迄今,这种传统的方法仍然是诊断和研究疾病最基本和最常用的方法。 (三)细胞病理学观察 通过采集病变处的细胞,涂片染色后进行观察、诊断。细胞的来源可以是直接采集于病变部位的脱落细胞,也可以是自然分泌物(如痰、乳腺溢液、前列腺液)、体液(胸腹腔积液、心包积液和脑积液)及排泄物(如尿液)中的细胞,以及通过内镜采集的细胞或用细针直接穿刺病变部位(如乳腺、甲状腺、前列腺、淋巴结、胰腺、肝、肾等),即细针穿刺(fine needle aspiration,FNA)所吸取的细胞。 (四)液体活检技术 液体活检是指通过采集患者外周血等样本进行可反映肿瘤分子谱特征的检测技术。主要研究对象为循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)与循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)。液体活检技术在肿瘤的早期诊断、疗效监测、预后评估及个体化治疗中具有重要的临床意义。 第二节　组织化学与免疫组织(细胞)化学技术 (一)组织化学(histochemistry) 一般称为特殊染色,通过应用某些能与组织或细胞的化学成分进行特异性结合的显色试剂,定位地显示病变组织、细胞的特殊化学成分(如蛋白质、酶类、核酸、糖类、脂类等),同时又能保存组织原有的形态改变,达到形态与代谢的结合。如用过碘酸Schiff反应(PAS)显示细胞内糖原的变化;用苏丹Ⅲ染色显示细胞内的脂肪滴等。 (二)免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)与免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC) 免疫组织化学(免疫组化)和免疫细胞化学是利用抗原抗体的特异性结合反应来检测和定位组织或细胞中的某种化学物质的一种技术,由免疫学和传统的组织化学相结合而形成。免疫组化染色技术具有敏感性高、特异性好、直观的原位定位等特点。 1.免疫组化染色方法和检测系统　免疫组化染色方法有很多,按标记物的性质可分为荧光法(荧光素标记)、酶法(辣根过氧化物酶,碱性磷酸酶等)、免疫金银法等;按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。最常用的检测显示系统是辣根过氧化物酶(HRP)?二甲基联苯胺(DAB)系统,阳性信号呈棕色细颗粒状。 2.免疫组化染色的结果判读　免疫组化中常见的抗原表达模式有以下几种:①细胞膜线性阳性反应,大多数淋巴细胞分化抗原定位于细胞膜,如CD20、CD3等的标记呈细胞膜线性阳性反应。②细胞质的阳性反应,根据抗原的亚细胞结构定位不同,又有数种表现形式,如细胞角蛋白(cytokeratin,CK)以及一些中间丝蛋白(vimentin)主要分布在近细胞膜处的胞质内;CD15和CD30等抗体的染色呈胞质内局限性点状阳性反应;BCL?2蛋白等定位于线粒体的抗原常表现为细胞质内弥漫性阳性反应。③细胞核阳性反应,如Ki?67、雌激素受体(ER)蛋白、孕激素受体(PR)蛋白等。有些抗体可同时出现细胞质和细胞膜的阳性表达,如EMA可呈细胞膜阳性和胞质内弥漫性阳性反应,CD15和CD30抗体可同时呈细胞膜阳性和胞质内点状阳性反应等。 3.免疫组化染色技术的应用　免疫组化染色已经成为医学基础研究和临床诊断中不可或缺的技术手段之一。广泛应用于各种蛋白质表达水平的检测、细胞属性的判定、淋巴细胞免疫表型分析、激素受体和耐药基因蛋白表达检测、细胞增殖和凋亡、细胞周期及信号转导的研究。 第三节　电子显微镜技术 电子显微镜和光学显微镜的基本原理相同,不同的是光镜的照明源是可见光,而电镜是以电子束为光源。电镜的透镜不是玻璃而是轴对称的电场或磁场。电镜技术使病理学对疾病的认识从