微生物学课件：第3章 病毒与亚病毒1.ppt

* Viruses range from 20 to 300 nm in diameter，不同病毒的毒粒大小差别很大，最小者如植物的双粒病毒直径仅18—20nm，最大者如动物的痘病毒的大小达300—450nmX170—260nm。 第二节 病毒的形态构造和化学成分 三、病毒的群体形态 在某些感染病毒的宿主体内，出现光学显微镜可见的 大小、形态和数量不等的小体，称为包涵体。 三、病毒的群体形态 若噬菌体标本经过适当稀释再接种细菌平板，经过一定时间培养，在细菌菌苔上可形成圆形局部透明区域，即噬菌斑。 若标本经过适当稀释进行接种并辅以染色处理，病毒可在培养的细胞单层上形成肉眼可见的局部病损区域，即空斑（plaque）或称蚀斑。 三、病毒的群体形态 植物病毒 敏感植物叶片 产生坏死斑，或称枯斑 三、病毒的群体形态 第三节 病毒的复制 病毒复制的特点： 严格细胞内寄生物，只能在活细胞内繁殖。 毒粒 宿主细胞 病毒核酸复制、表达 病毒核酸和蛋白质 装配形成子代毒粒 释放至细胞外 原料； 能量； 生物合成场所； 一、病毒的复制 ① 吸附； ② 侵入； ③ 增殖（复制与生物合成） ； ④ 成熟或装配； ⑤ 裂解或释放； 第三节 病毒的复制 病毒的一个完整复制周期包括以下五个步骤： 侵染大肠杆菌的T偶数噬菌体，其毒粒由头部和尾部组成。 一、病毒的复制 1、吸附： 病毒受体 病毒吸附蛋白（配体） 一、病毒的复制 1、吸附： 吸附的机理：尾丝尖端与受体发生共价结合。 影响因素：噬菌体数量；阳离子等。 一、病毒的复制 1、吸附： 吸附于大肠杆菌菌体上的噬菌体 一、病毒的复制 2、侵入： 以注射方式将噬菌体核酸注入细胞 一、病毒的复制 病毒核酸侵入细胞内 宿主细胞的代谢发生改变 病毒利用宿主的生物合成机构和 场所，使病毒核酸表达和复制， 产生大量的病毒蛋白质和核酸。 3、增殖： 一、病毒的复制 左图：病毒核酸链接 入宿主核酸链 右图：病毒核酸复制 病毒核酸的复制 3、增殖： 一、病毒的复制 4、装配： 装配过程包括4个完全独立的亚装配途径。 一、病毒的复制 5、裂解： 大肠杆菌死亡并破裂，释放出里面的子代噬菌体。 一、病毒的复制 从裂解细胞中释放出的子代噬菌体 5、裂解： 一、病毒的复制 效价表示每毫升试样中所含有的具侵染性的噬菌体粒子数，又称噬菌斑形成单位数。 斑点试验法 液体稀释管法 双层平板法 单层平板法 快速玻片法 二、噬菌体效价的测定 第三节 病毒的复制 斑点试验法 涂布菌液液 45C培养 . . .. 点样 噬菌斑 。 。 。 。 二、噬菌体效价的测定 液体稀释管法 试样（ 未知效价的噬菌体液） 培养液和宿主细胞 计数管中完整宿主细胞数 （定时取样对活细胞计数） 噬菌体数=原细胞数 — 活细胞数 二、噬菌体效价的测定 双层平板法 琼脂平板 菌液+噬菌体试样+琼脂培养基 培养10天 计数噬菌斑 噬菌斑数=试样中噬菌体数 二、噬菌体效价的测定 快速玻片法 试样+宿主细胞 +琼脂培养基 低倍镜下计数噬菌斑 充分混匀 短期培养 布在灭菌玻片上 二、噬菌体效价的测定 第三节 病毒的复制 1939年，Max Delbruck Emory Ellis： E. coli / bacteriopage 1、用噬菌体的稀释液感染高浓度的宿主细胞； 2、数分钟后，加入抗噬菌体的抗血清（中和未吸附的噬菌体）； 3、将上述混合物大量稀释，终止抗血清的作用和防止新释放 的噬菌体感染其它细胞； 4、保温培养并定期检测培养物中的噬菌体效价（对噬菌体含量 进行计数）； 5、以感染时间为横坐标，病毒的感染效价为纵坐标，绘制出 病毒特征性的繁殖曲线； 该实验标志着分子病毒学、分子生物学和分子遗传学的建立 Max Delbruck因此荣获1969年Nobel Prize 三、一步生长曲线 噬菌体复制（繁殖） 的三个阶段： 1、吸附期； 游离的噬菌体吸附到宿主细胞。 2、潜伏期； 从噬菌体吸附到细胞到释放出新噬菌体的最短时期。 3、裂解期； 随着菌体不断破裂，新噬菌体数目增加，直到最高值 三、一步生长曲线 取培养物直接测定 病毒数量 将培养物过滤去细 胞后测定病毒数量 将细胞裂解后测定病毒的数量。 前期可将培养物先离心去上清以消除未吸附病毒 的影响 裂解量：每个受染细胞所产生的子代病毒颗粒的平均数目。 其值等于潜伏期受染细胞的数目除以稳定期受染细胞所释放的全部子代病毒数 目，即等于稳定期病毒效价与潜伏期病毒效价之比。 三、一步生长