微生物学课件：第2章 纯培养和显微技术.ppt

图3-11 电子显微镜构造和光成像原理 1、电子束照明系统：电子枪、聚光镜； 2、成像系统： 物镜、中间镜、投影镜； 3、真空系统： 4、记录系统 电镜与光镜光路图比较 主要电镜制样技术 ? 超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备示意图 ?负染色技术（Negative staining）与金属投影 染色背景，衬托出样品的精细结构 ?冰冻蚀刻技术（Freeze etching） （技术示意图） 冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒 和膜表面结构。 快速冷冻深度蚀刻技术（quick freeze deep etching） ?电镜三维重构技术 电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的 具有重要应用前景的一门新技术。 电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振 分析技术相结合，是当前结构生物学（Structural Biology） ——主要研究生物大分子空间结构及其相互关系的主要实验手段。  主要电镜制样技术 ? 超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备示意图 ?负染色技术（Negative staining） 染色背景，衬托出样品的精细结构 ?冰冻蚀刻技术（Freeze etching） （技术示意图） 冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒 和膜表面结构。 快速冷冻深度蚀刻技术（quick freeze deep etching） ?电镜三维重构技术(自学） 电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的 具有重要应用前景的一门新技术。 电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振 分析技术相结合，是当前结构生物学（Structural Biology） ——主要研究生物大分子空间结构及其相互关系的主要实验手段。  超薄切片技术 电子束穿透能力有限，为获得较高分辨率，切片厚度一般为40～50nm－－超薄切片； 超薄切片制作主要步骤： 图3-12 电镜超薄切片样本制备示意图 锇酸 戊二醛 高锰酸钾 环氧树脂 40～50nm 脂质：锇酸 蛋白质：铅盐 核酸：醋酸铀 扫描电镜 ?原理与应用： ?电子“探针”扫描，激发样品表面放出二次电子，探测器收集二次电子成象。 ? CO 2临界点干燥法防止引起样品变形的表面张 力问题 观察样品表面的形态特征。 图3-17 四膜虫的扫描电镜图像（韩飞，丁明孝）　 一、显微镜的种类及原理 5. 透射电子显微镜；6. 扫描电子显微镜 参见P25 二、显微观察样品的制备 略！ 第二章思考题 1、为什么无菌技术和纯培养技术是微生物学建立与发展的 基石？ 2、试分析比较各种获得微生物纯培养方法的特点 3、试利用表格形式对各类显微镜在原理、样品制备和观察 方面的异、同进行概括、比较。 4、你认为样品制备和显微观察中（光镜和电镜）应通过哪 些方法改变样品的反差以改善观察效果？ 5、 试找到一篇使用微生物照片的科学文献（科研论文）， 分析该文为什么要使用微生物照片，采用的是何种显微 观察技术？依你之见，该文作者的这张照片还可以用哪 些技术获得？ 三、用液体培养基分离纯培养 0.048 0.048 + 0.0012 + 0.0002 = 0.975 稀释法进行液体分离必须在同一个稀释度的许多 平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长。 例如：若同一稀释度的试管中有95%表现为不生长，则 生长的试管中仅含一个细胞的几率为：4.8%； 含二个细胞的几率为：0.12%； 含三个细胞的几率为：0.002% 在有细菌生长的试管中得到纯培养的几率为97.5% 参见P17 四、单细胞（孢子）分离 一般采用显微操作仪，在显微镜下进行； 操作难度与细胞或个体的大小成反比； 参见P17～18 通过机械、空气或油压传动装置来减小手的动作幅度， 在显微镜下用毛细管或显微针、钩、环等挑取单个 微生物细胞或孢子以获得纯培养。 利用刚才介绍的技术，我们是否有可能获得某一个生态环境（例如1克土壤）中所有种类细菌的纯培养？ 假设待分离的细菌均能利用某一相同的培养基生长 同一生态环境中混杂存在着不同种类的细菌； 不同细菌在数量存在差异； 微生物在自然条件下存在的特点： 五、选择培养分离 抑制大多数其它微生物的生长； 使待分离的微生物生