微生物学课件：第07章 遗传变异和育种修改稿.ppt

遗传物质在微生物细胞内存在的部位和方式 一、7个水平 该部分内容自学 二、原核生物的质粒 原核生物的质粒 质粒的概念： 游离于原核生物基因组以外，具有独立复制能力的小型共价闭合环状的dsDNA分子，即cccDNA。 质粒赋予细菌某些对其生存并非必不可少的特殊功能。 如：产毒、抗药、产特殊酶、降解有毒化合物等 质粒的主要类型 典型质粒简介 F质粒： 大肠杆菌等部分细菌内存在，决定其性别并具有转移能力的质粒。 R质粒： 表现为对抗生素等药物的抗性。 Col质粒： 细菌素的概念 第二节 基因突变和诱变育种 基因突变（gene mutation） 基因突变的类型 突变率（mutation rate） 细胞在每一世代中发生某一性状突变的几率。 某一基因的突变一般是独立发生的，他的突变率不影响其他基因的突变。 通常突变发生的几率为10-6～10-9 基因突变的特点 基因突变自发性和不对应性的证明 1.Luria等的变量实验（fluctuation test） 2.Newcomb的涂布实验 3.Lederberg等的影印平板法（replica plating） 基因突变及其机制 紫外线对DNA的损伤及其修复 UV导致遗传物质产生嘧啶二聚体（TT、TC、CC），造成局部DNA分子无法配对，引起微生物的死亡或突变。 一般微生物具有光复活作用。 在利用UV进行诱变育种等工作时，应在红光灯下进行照射和后继操作，并放置在黑暗条件下培养。 突变与育种 一、自发突变与育种 （breeding by spontaneous mutation） 1.从生产中育种。 仔细观察，做“伯乐” 2.定向培育优良菌株。 卡介苗（BCG vaccine）：Bacillus Calmette-Guerin 诱变育种（breeding by induced mutation） 诱变育种是指利用物理、化学等诱变剂处理均匀而分散的微生物细胞群，在促进其突变率显著提高的基础上，采用简便、快速和高效的筛选方法，从中挑选出少数符合目的的突变株，以供科学试验和生产实践使用。 诱变育种的几个原则 诱变育种的几个基本原则 诱变育种的几个基本原则 诱变育种的几个基本原则 诱变育种的几个基本原则 3类突变株的筛选方法 第三节 基因重组和杂交育种 一、原核生物的基因重组 转化 转导 接合 原生质体融合 真核微生物的基因重组基因工程 该部分内容自学 2. 机制 (大肠杆菌的接合机制) 接合作用是由一种被称为F因子的质粒介导 F因子的分子量通常为5×107，上面有编码细菌产生性菌毛 （sex pili）及控制接合过程进行的20多个基因。 含有F因子的细胞：“雄性”菌株（F+），其细胞表面有性菌毛 不含F因子的细胞：“雌性”菌株（F-），细胞表面没有性菌毛 参见P 217 F因子为附加体质粒 既可以脱离染色体在细胞内独立存在，也可插入（整合）到染色体上 F因子的四种细胞形式 (参见P202) a）F-菌株， 不含F因子，没有性菌毛，但可以通过 接合作用接收 F因子而变成雄性菌株（F+）； b）F+菌株， F因子独立存在，细胞表面有性菌毛。 c）Hfr菌株，F因子插入到染色体DNA上，细胞表面有性菌毛。 d）F′菌株，Hfr菌株内的F因子因不正常切割而脱离染色体时， 形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子，特称为F′因 子。 细胞表面同样有性菌毛。 1） F+×F-杂交 杂交的结果：给体细胞和受体细胞均成为F+细胞 理化因子的处理可将F因子消除而使F+菌株变成F-菌株 F+菌株的F因子向F-细胞转移，但含F因子的宿主细胞 的染色体DNA一般不被转移。 （参见P 215） Hfr菌株的F因子插入到染色体DNA上，因此只要发生接合转移转移 过程，就可以把部分甚至全部细菌染色体传递给F-细胞并发生重组 ，由此而得名为高频重组菌株。 2）Hfr ×F-杂交 （参见P 217） Hfr菌株仍然保持着F+细胞的特征，具有F性菌毛，并象F+一样与F- 细胞进行接合。所不同的是，当OriT序列被缺刻螺旋酶识别而产生 缺口后，F因子的先导区(leading region)结合着染色体DNA向受体细 胞转移，F因子除先导区以外，其余绝大部分是处于转移染色体的末 端，由于转移过程常被中断，因此F因子不易转入受体细胞中，故 Hfr×F-杂交后的受体细胞(或接合子)大多数仍然是F-。 染色体上越靠近F因子的先导区的基因，进入的机会 就越多，在F-中出现重组子的的时间就越早，频率也高。 F因子不易转入受体细胞中，故Hfr×F- 杂交后的受体细胞（或称接合子）大多 数仍然是F-。 （参见P218） 3）F′×F-杂交