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哈啶油的紫外谱线组法检测 哈拉多元醇是水稻科动物的拉na主管，通过采集、干燥和精制而成。据《中华人民共和国药典》(2005年版)一部收载,具有补肾益精,养阴润肺的功效。临床用于阴虚体弱,神疲乏力,心悸失眠,盗汗不止,痨嗽咳血。由于哈蟆油药用价值和经济价值都很高,市场上常有以伪品哈蟆油充当正品哈蟆油销售使用的情况。其外观性状较为相似,尤其是哈蟆油常以粉末形式入药,伪品哈蟆油更易于正品哈蟆油混淆,误用、混用现象时有发生。为了寻找快速、简便、准确地鉴别正品哈蟆油与伪品哈蟆油,特别是鉴别粉末的方法,我们对伪品哈蟆油的石油醚、三氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇和95%乙醇提取液分别进行了紫外光谱法鉴别研究并与正品哈蟆油相比较。结果此种方法鉴别中药材哈蟆油具有特征性强,取样量小、简便、快速、准确等特点且方法可靠、简单,重现性强,可供哈蟆油真伪鉴别参考。现将结果报道如下。 1 药材样品鉴定 安捷伦UV8453型分光光度计,石油醚、三氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇和95%乙醇均为分析纯,药材样品为本院生药教研室姜大成教授鉴定,见表1。 2 伪品的紫外特征 分别取上述干燥药材碎成粗粉,精密称定约0.2 g,分别加入石油醚(60～90 °C)10 mL,超声波提取20 min,滤过,定容至10 mL量瓶中,配制成浓度相当于生药浓度约为20 mg/mL的供试溶液,石油醚为空白液;按分光光度法测定各样品的紫外吸收广谱,结果见图一及表2、表3并通过图一得出图二哈蟆油的石油醚提取液紫外一阶倒数图谱。其余步骤同上,分别加入三氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇、95%乙醇超声提取20 min,配制成供试品溶液,相应的溶剂作为空白液,结果见表2,表3及图3至图10。 结合图1、图2和表2、表3可以明显看出样品中伪品B～H与正品A有明显的差别。从峰形(正品哈蟆油的石油醚提取液零阶倒数紫外图谱的峰形较缓,220～250 nm之间的峰形类似马背状)和吸收峰位置可判断出B～H与A有明显的差别,而且伪品G在268 nm处是较强的吸收也明显的区别于正品。 结合图3、图4和表2、表3可以看出伪品C、D、E、F、H的紫外特征明显区别于正品A(正品哈蟆油三氯甲烷提取液零阶倒数紫外谱图的峰形较缓,特征吸收峰值为:(243±1)nm处有最强吸收峰,(275±2)nm处有特征吸收峰,且在200 nm附近有明显的末端吸收)。从峰形上能明显的区别出伪品C、D、E和F;从紫外吸收广谱数据上也能明显的区别出H。 结合图5、图6和表2、表3可以看出伪品E、F、与正品A(正品哈蟆油醋酸乙酯提取液零阶倒数紫外谱图的吸收峰峰形呈鹅头状,在(270±2)nm处有圆滑最强吸收峰,在(253±2)nm附近有一特征吸收峰,但有时被掩盖。其一阶导数紫外光谱在(264±4)nm处有最强吸收,在(251±2)nm处有次强吸收(有时被掩盖),(287±2)nm处有最弱吸收)在峰形上有明显的区别,且伪品F无270 nm附近的特征吸收峰。伪品E的一阶导数紫外光谱明显区别于正品。 结合图7、图8和表2、表3可以看出:从峰形上可以明显的区别出伪品E、F,伪品E和G在234 nm附近没有特征吸收,也可加以区别。伪品H在268 nm处有特征吸收峰,和正品(哈蟆油正品的正丁醇提取液零阶倒数紫外谱图的吸收峰在(234±2)nm处有最强吸收,在(272±3)nm处有一明显的特征吸收峰)也可以区别。伪品B、C、D、F的一阶导数紫外光谱的吸收峰峰位明显区别于正品。只是在短波长阶段的吸收不规律,区别不是很明显。 结合图9、图10和表2、表3可以明显的看出正品哈蟆油(哈蟆油正品的95%乙醇提取液零阶倒数紫外谱图的吸收峰在(203±1)nm处有最强吸收峰,在(230±5)nm处有明显的特征吸收峰,而且在200 nm附近有较强的末端吸收;其一阶导数紫外光谱在(201±1)nm处有最强吸收)和伪品哈蟆油之间的区别。从吸收峰的形状上可以明显地区别伪品B、E。从表2和表3可以看出哈蟆油的正品和伪品在吸收峰的峰位上没有明显的区别。 3 阶导数光谱鉴别 3.1 结合以上实验可以得出:本课题所收集到的7个不同的伪品哈蟆油通过以上五种不同极性的有机溶剂超声提取后用紫外光谱及其一阶导数光谱完全鉴别出来。其鉴别情况详见表4。由此,笔者认为石油醚、三氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇和95%乙醇五种溶剂联合使用,是UV光谱鉴别哈蟆油真伪品的最佳方法。 3.2 用紫外谱线组图谱方法,通过综合比较其谱图的差异,可获得较好的鉴别结果。纵观紫外光谱的全貌,哈蟆油伪品的各溶剂提取液的谱图,在峰形、吸收峰数目和峰位均有明显差异,具有非常明显的鉴别指标,达到鉴别药材的目的。