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一种提取白藜芦醇的新工艺开发 白橙醇也被称为三酚，具有3、4、5-三羟基-1、2-二苯乙烯（3、4，5-）等多种植物。它存在于12种植物中，如葡萄、虎杖、花、桑椹和其他72种植物中。这种复合物为c14h12o3。这是一种无色的针状结晶，很难溶于水中。它溶于乙醚、乙醇、乙醇和乙酸乙酯、丙酮。白藜芦醇主要有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗氧化、抗自由基、保护肝脏、保护心血管和抗心肌缺血等功能。其中, 最令人瞩目和最有发展前景的是抗肿瘤作用, 因此, 它在医药、食品工业上的应用越来越广, 市场价值极高。 近年来, 欧美各国已将白藜芦醇开发成产品上市, 国内生产厂家大约有l0余家, 大部分产品用于出口。目前, 在欧美已批准上市的白藜芦醇高端制剂产品 (包括药品及保健品) 已近千余种, 该品全球使用者约2亿人, 并且平均每年以5 000万人的速度增长。据估计, 白藜芦醇制剂的销售未来8年内将达到5～8亿美元, 市场缺口较大, 将形成非常巨大的产业。 白藜芦醇生产目前主要以虎杖为原料。由于虎杖资源有限, 开发其他原料的提取工艺具有重大意义。葡萄穗轴是葡萄酒厂酿酒后的废渣, 国内一般只简单地丢弃成为固体垃圾或进行焚烧处理, 造成资源浪费, 污染环境。对葡萄穗轴废渣加以合理利用, 提取其中的有用物质, 不但可以解决葡萄酒厂的后顾之忧, 而且还可以创造经济价值。因此, 从葡萄穗轴废渣中提取白藜芦醇具有重要意义。本实验探索了从葡萄穗轴废渣中提取白藜芦醇的工艺条件, 期望开发出一条生产白藜芦醇的绿色工艺路线。 1 实验部分 1.1 仪器、检测方法 葡萄穗轴废渣为天津葡萄酒厂酿酒废弃物;白藜芦醇标准品为美国Sigma公司产品;乙醇为医药级, 天津市科锐思精细化工有限公司;甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿为AR, 天津大学科威公司。 756MC型紫外可见分光光度计, 上海精密科学分析仪器厂;ZF-2型四用紫外分析仪, 上海顾村电光仪器厂;RE52CS旋转蒸发器, 上海亚荣生化仪器厂。 1.2 标准品比移值对照分析 实验用薄层色谱法进行定性分析和分离白藜芦醇, 薄层板为2.5 cm×10 cm GF254硅胶板, 展开剂为V(氯仿) ∶V(乙酸乙酯) ∶V(甲酸) =5.0∶4.0∶0.4, 和标准品的比移值进行对照分析。定量分析采用紫外分光光度法, 白藜芦醇在紫外光区306 nm处有最大吸收, 实验中提取浓缩液经薄层层析分离提纯后, 用756MC型紫外可见分光光度计在306 nm处测其吸光度值, 由标准曲线计算出白藜芦醇质量浓度。 1.3 标准曲线及方法 精密称取白藜芦醇标准品, 置于容量瓶中, 用甲醇溶解并稀释到刻度定容。分别配制不同浓度的标准溶液, 用756MC型紫外可见分光光度计在306 nm处测其吸光度值。测得标准曲线为:y=0.1464x+0.0788 (R2=0.9914) 。其中y为吸光度值,x为白藜芦醇的质量浓度, 线性范围为1.25～10.00 μg/mL。 称取一定量干燥粉碎好的葡萄穗轴废渣粉, 加入适量的提取剂, 在一定温度下进行搅拌, 加热提取一定时间, 提取液用旋转蒸发器蒸发掉乙醇, 浓缩, 取一定量的浓缩液用薄层层析法分离纯化后, 收集白藜芦醇斑点后用一定量的甲醇溶解, 用紫外分光光度计测其吸光度值, 由标准曲线计算得出白藜芦醇质量浓度, 进而得出其提取率。 2 结果与分析 2.1 单因素实验 2.1.1 提取率对原料提取率的影响 根据白藜芦醇的溶解性, 考察了甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯4种有机溶剂对提取率的影响, 如表1所示。可见, 不同溶剂所得的提取率不同, 甲醇的提取效果最好, 白藜芦醇的提取率达到0.14 %, 乙醇次之。由于甲醇和乙醇的极性较强, 更有利于原料中具有较大极性的白藜芦醇的溶出, 采用丙酮和乙酸乙酯为提取剂, 白藜芦醇的提取率较低, 可能与它们的极性较弱有关, 另外极性较强的溶剂能使原料的组织纤维溶胀, 提高提取率。但甲醇毒性较大, 综合考虑, 选择安全、无毒且易回收的乙醇为提取剂。 2.1.2 乙醇体积分数对白垩系甲基酚类化合物溶解度的影响 在其他条件不变的情况下, 以不同体积分数的乙醇水溶液对葡萄穗轴废渣进行提取, 结果见表2。 乙醇体积分数为50%～60%时, 提取率最高, 达到0.21%。随着乙醇体积分数的增加, 极性不断减小, 白藜芦醇虽具有极性基团酚羟基, 但二苯乙烯骨架又是非极性基团, 所以在高体积分数的乙醇溶液中溶解度较高。但用体积分数高于70%的乙醇提取, 提取率反而下降, 可能是由于植物组织在高体积分数的乙醇水溶液中不易溶胀, 影响了溶剂的扩散作用, 导致提取率降低。从薄层分析结果看, 体积分数为60%的乙醇水溶液提取时, 杂质点也较少, 提取效果较好。 2.1.3 不同提取时间对白垩系白革醇提取