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chamerin在慢性胆囊炎中的表达及其意义 代谢综合征是由胰岛素抵抗引起的一系列临床、生化和代谢异常，导致各种物质的代谢异常，尤其是中部肥胖、高血压、高血糖和异常血脂。Chemerin是Bozaoglu等采用新的信号序列捕获技术确定的新脂肪细胞因子,该基因主要表达于成熟的脂肪细胞,并作为细胞因子调节脂肪细胞的分化。研究发现chemerin是肥胖时脂肪组织表达增高的脂肪细胞因子,与肥胖者三酰甘油和血清游离脂肪酸水平增高有关,但其影响糖、脂代谢以及如何参与肥胖诱导的IR的确切机制目前尚不清楚。本研究旨在通过检测维吾尔族MS患者chemerin在腹部大网膜、皮下脂肪组织mRNA的表达水平和血浆中的变化,及其与体质量指数(body mass index,BMI)、腰围、臀围、腰臀围比、血糖、血脂等之间的关系,进而探讨chemerin在MS中的可能作用及其与MS各组分之间的关系。 1 对象和方法 1.1 chemin的诊断 120例研究对象均来自2007-06-2009-03新疆维吾尔自治区人民医院慢性胆囊炎和非胆囊炎择期手术的维吾尔族患者。其中慢性胆囊炎患者81例,非胆囊炎患者39例,非胆囊炎患者主要为胆囊息肉、食道裂孔疝、腹壁切口疝等患者。在排除了慢性胆囊炎对临床生化指标和MS可能的影响后,根据脂肪组织标本的留取和MS的诊断标准,选择81例慢性胆囊炎(MS 39例,非MS 42例)手术患者作为chemerin研究的对象。MS诊断根据2005年国际糖尿病联盟所通过的MS的全球共识定义:一个MS个体必须具备中心性肥胖(中国人腰围切点:男性≥90 cm,女性≥80 cm),以及下列4个因素中的任意两项:①三酰甘油水平升高(三酰甘油1.7 mmol/L),或已接受针对此脂质异常的特殊治疗;②高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol, HDL-C)水平降低[HDL-C1.03(男),1.29 mmol/L(女)],或已接受针对此脂质异常的特殊治疗;③血压升高(收缩压≥130 mm Hg或舒张压≥85 mm Hg),或此前已被诊断为高血压而接受治疗;④空腹血糖升高(空腹血糖≥5.6 mmol/L)或已被诊断为2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)。所有研究对象年龄30岁,无血缘关系及异族通婚史。同时排除:①动脉血管或外周血管疾病;②甲状腺功能不全,肝肾功能不全;③急性炎性和创伤等应急情况;④恶性肿瘤以及饮酒或毒品史的个体。所有研究均获得该医院伦理委员会批准,并获得研究对象的知情同意。 1.2 方法 1.2.1 血清学指标检测 研究对象脱鞋、免冠,仅穿内衣裤测量身高、体质量、腰围(平肋弓下缘与髂前上棘连线中点)、臀围(耻骨联合水平测量臀部最大周径),并计算BMI与腰臀围比。术前所有患者禁食8 h以上,手术当天平卧,分别测量两次收缩压与舒张压并取平均值;采集肘静脉血5 mL,分别测空腹血糖、空腹胰岛素(fasting plasma insulin, FINS)、三酰甘油、总胆固醇、HDL-C、LDL-C等生化指标;血浆chemerin采用酶联免疫法检测,chemerin试剂盒由北京爱迪博生物制品公司提供,批内变异3.5%。IR用最小稳态模型方法判定,公式为: 稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)=空腹血糖(mmol/L)×空腹胰岛素(mU/L)/22.5。 1.2.2 血管自转体的制备 所有受试者术中取皮下和大网膜脂肪组织各1块,去除肉眼可见的血管和血块,用无菌生理盐水冲洗并剪成0.5 g大小脂肪块,分装在无菌冻存管中,密封后立即置液氮罐冷冻,并转移至-70 ℃冰箱冻存至总RNA提取。 1.2.3 rna的纯度和浓度 用经典TRIZOL(Invitrogen公司)法提取脂肪组织总RNA,使用Gene Quant核酸定量分析仪测定总RNA吸光度,计算RNA浓度和纯度,确保A260/A2801.8,用1%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性。 1.2.4 cheren基因序列和pcr扩增 引物设计与合成:根据人chemerin与β-actin 的cDNA序列,分别由宝生物工程(大连)有限公司设计引物,序列见表1。 取1 μg RNA经逆转录合成cDNA,逆转录反应根据购于Promega公司的逆转录试剂盒使用说明操作。Real time RT-PCR反应试剂购于Bio-Rad公司的SYBR Green Supermix。以cDNA为模板分别扩增chemerin和内参照β-actin基因。chemerin反应条件:95.0 ℃预变性3 min,95.0