hplc测定玉龙美腮颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量.docxVIP

hplc测定玉龙美腮颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量 七宝美赞是在明代邵英节传的七宝美赞基础上发展起来的，经过最新的现代科学工艺，开发出具有调理肝肾功能的药物。七宝美髯颗粒由滋补肝肾类药组成, 有制何首乌、当归、补骨脂、枸杞子、菟丝子、茯苓等中药, 经提取加工制成, 用于肝肾不足、须发早白、头眩耳鸣、腰酸背痛等症。其中, 补骨脂与枸杞子、菟丝子、怀牛膝, 同为臣药, 能双补肾之阴阳, 补骨脂素、异补骨脂素为补骨脂的主要活性成分。目前虽有七宝美髯颗粒的质量研究, 但尚未对该药中的补骨脂活性成分进行测定, 为了进一步完善七宝美髯颗粒的标准, 更好地控制该制剂的质量, 本文采用液相色谱法对制剂中的补骨脂素与异补骨酯素。 1 药品与药品层面 高效液相色谱仪 (Shimadzu 20A) ;电子天平 (Metler AB 265-S) ;紫外分光光度计 (岛津 UV-2450) ;补骨脂素 (批号:110739-200309) 、异补骨脂素 (批号:110738-200410) 对照品购自中国食品药品检定研究院;七宝美髯颗粒 (批号:120305, 120612, 120820) ;制何首乌、当归、补骨脂、枸杞子、菟丝子、茯苓、牛膝均购自广州市同健医药连锁有限公司;甲醇 (色谱纯, OCEANPAK) ;水为纯化水。 2 方法和结果 2.1 流动相、检测波长 色谱柱:Diamonsil C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) ;流动相:甲醇-水 (55∶45) ;流速:1.0 mL/min;检测波长:246 nm;柱温:室温;进样量:10 μL。 2.2 溶液的制备 2.2.1 成分配液的制备 精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品分别为10.6 mg和11.3 mg, 置100 mL容量瓶中, 用甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 制成浓度分别为106 μg/mL和113 μg/mL的储备液。精密吸取储备液5 mL置25 mL容量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 得到浓度分别为21.2 μg/mL和22.6 μg/mL的补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品溶液。 2.2.2 样品溶液的制备 精密量取本品2.0 g置10 mL量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。 2.2.3 阴性对照溶液 取处方中除补骨脂外的其余中药, 参考2010年版中国药典, 按七宝美髯颗粒的工艺制备不含补骨脂的阴性对照制剂, 按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。 2.3 对照品溶液的确定 分别以补骨脂素对照品溶液、异补骨脂素对照品溶液在200 ～ 400 nm波长范围内扫描, 结果补骨脂素对照品在波长为246 nm处有最大吸收, 异补骨脂素对照品溶液在247 nm处有最大吸收。故以247 nm作为补骨脂素、异补骨脂素的检测波长。 2.4 柱温的选择和柱压的确定 固定色谱柱和梯度条件, 设定不同柱温考察其对所得色谱图的影响, 结果见表1。虽然较低的柱温有利于补骨脂素和异补骨脂素两峰的分离, 但是本地区在多数天气情况下20 ℃的柱温, 需要配备可降温的柱温箱, 柱压较高也不利于仪器的维护, 因此选择30 ℃为柱温, 分离可满足定量分离需要, 柱压适中。在夏天, 实验室超过30 ℃时, 如果柱温箱不能降温, 建议保持空调降温。 2.5 色谱图的保留时间 精密量取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液注入液相色谱仪中, 按照色谱条件分别进样, 进样量为10 μL, 记录色谱图, 在与对照品色谱图主峰相同的保留时间上, 供试品溶液有对应峰显示, 阴性对照溶液无对应峰。结果表明, 阴性溶液对检测结果无干扰, 结果见图1。 2.6 标准曲线的绘制 精密吸取补骨脂素、异补骨脂素对照品储备液适量, 用甲醇分别稀释成浓度为10.6、15.9、21.2、31.8、42.4 μg/mL和11.3、16.9、22.6、33.9、45.2 μg/mL, 注入液相色谱仪中, 按前述色谱条件测定, 以峰面积 (Y) 为纵坐标, 进样量 (X) 为横坐标, 绘制标准曲线, 回归方程分别为:补骨脂素:Y1=2 900.9X1+ 3.5×10-11(r1=0.9999) , 异补骨脂素:Y1=77.356X1+ 3.3014 (r2=1.0000) 。结果表明补骨脂素浓度在10.6 ～ 42.4 μg/mL时与峰面积呈良好线性关系, 异补骨脂素浓度在11.3 ～ 45.2 μg/mL时与峰面积呈良好线性关系。 2.7 进样和色谱条件 取同一对照品溶液进行试验, 每次进样10 μL, 按“2.2.1” 项下的色谱条件重复进样6次, 记录主峰面积。补骨脂素、异补骨脂素的RSD分别为 1.24%和0.98%。结果表明仪器精密度良好。 2.8 补骨脂素、异补骨脂