抗原与抗体的相互作用及免疫学检测-课件.pptxVIP

互作用及免疫学检测 1 如：溶细胞效应、促吞噬作用、凝集作用、 沉淀作用、调节作用等，形成一整套机体 体液免疫功能。 n 抗原决定簇与抗体结合部位的结合，要求 分子结构有互补性，也因此具有高度的特 异性。 2 面的特定部位，即抗原决定簇和抗体结合位点之 间，且以亲和力的作用方式结合在一起。抗原抗 体的结合并没有共价键形成，而是由这些特定部 位之间的短程分子力相互作用的结果。这些吸引 力只有在极短的距离内才有效。因此抗原决定簇 与抗体结合位点在空间上必须处于紧密接触状态， 才能产生足够的结合力。这种分子间的互补结构 决定了抗原抗体结合的专一性。 第一节抗原与抗体反应的特点 一、特异性 抗原与抗体相互结合只局限于一些大分子表 面的特定部位，即抗原决定簇和抗体结合位点之 3 3、疏水作用 4、氢键 4 Ab+Ag Ab:Ag 由于抗原抗体结合的可逆性，可利用 亲和层析法分离纯化抗原或抗体；利用待 测抗原和标准抗原与抗体的竞争结合，进 行抗原或抗体的定量测定，如放免检测法、 酶联免疫吸附法等 5 同时也是抗原抗体反应的继发过程。 当抗原与同型抗体相遇时，在合适条 件下，不论彼此量的多少，都立即发生特 异性的结合形成抗原抗体复合物，这一过 程通常只需要几秒的时间便可完成，称为 反应的一级阶段。 6 出现可见的凝集和沉淀，称为反应的二级 阶段。这一阶段是抗原抗体网格生长的阶 段，速率要慢的多，且在很大程度上依赖 于温度、离子强度等外界条件，但更重要 的是需要合适的抗原抗体分子比例。只有 当二者的结合价彼此饱和时，才能连接成 一个大网格样凝集物，出现凝集或沉淀。 7 8 、抗原抗体能形成复合物但不一定能形成沉淀； 4、抗原抗体结合形成大分子凝集物的前提是要求 其结合价彼此饱和； 5、当抗原大大过量时，只有溶解状态的抗原抗体 复合物，而无沉淀出现，在免疫检测中称为前 带现象。 9 外，还依赖于动物机体的免疫应答能力。机体免疫应 答能力又受遗传因素的控制及机体的生理状况、抗原 物质进入机体的途径和佐剂的使用等因素的影响。 由于动物的遗传性不同，同一抗原对不同种动 物、同种不同品系甚至不同个体，产生免疫应答的强 弱是不同的。因此，在进行动物免疫时，必须选择对 该抗原敏感的动物，而且必须是年轻的、健康的。常 用的动物有马、羊、兔、鼠和豚鼠。 10 入该机体时，血清中抗体很快出现，含量也远 高于初次反应，其抗体成分主要是IgG，此为再 次反应。 11 疫系统，使初次反应与再次反应结合在一 起，其免疫效果更为理想。另外，在佐剂 中含有激活巨噬细胞等生理功能的卡介苗 类物质，可提高抗原的免疫原性，因此要 获得高效价的抗血清，常使用各种类型的 佐剂。 12 动物个体的不同组织部位对抗原刺激 的敏感性也是不同的。淋巴结、脾脏、足 掌、眼睑结膜等是反应敏感部位，也是免 疫动物的常用部位。 13 弗氏佐剂的成分和使用 3、免疫方法：淋巴结注射、腹部皮下注射、 四足掌皮内注射。 4、免疫次数：每隔7-10天免疫一次，共需3- 4次。第二次免疫后开始测效价。 14 2、抗血清制备：血液室温放置1-2h或冰箱内4度过 夜，血清便可充分析出，用滴管吸出或离心分离 取得。分离好的血清加入0.02%叠氮化钠，在4度 冰箱内保存可长达半年。 3、效价测定：用免疫动物时的抗原浓度作抗体效价 测定的抗原浓度。以出现沉淀反应的抗血清的最 大稀释倍数来表示抗血清的效价。 15 行，而无需对抗体进行纯化。 随着免疫检测技术的发展，如用铁蛋 白、胶体金等标记抗体作免疫电镜观测， 用荧光素、酶、同位素标记抗体作组织细 胞染色，或对抗原进行定量测定，就必须 对抗体进行纯化，但这类的纯化多数是类 别的纯化。 16 33%饱和度的硫铵可以沉淀所有各类免疫球 蛋白；缺点是分离的纯度较差，对IgA类抗 体来说，浓盐可使其形成二聚体，不宜采用。 17 2、Cohn冷酒精沉淀法： 18 1000000，故可通过分子筛将两者分开而得 到纯品。 19 3、硫铵盐析和DEAE-纤维素柱层析法纯化IgG 在pH7.5的溶液中IgG带正电，其他血清 蛋白带负电，因此阴离子交换剂DEAE-纤维 素可以一次将IgG提纯到很高的纯度 20 21 素、酶、放射性同位素等标记方法提高可测 性，才便于在免疫检测中运用。可见性反应 的出现，对抗原抗体分子合适比例的要求远 比对彼此绝对量方面要高得多。这就是说， 一方面在进行免疫检测时要注意抗原抗体的 用量；另一方面只要提高可见度或可测性， 便可大大提高免疫检测方法的灵敏度。 22 一、凝集反应 凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合 反应出现的可见性现象。颗粒抗原如完整 的细菌、红细胞等与相应抗体相混合，在 一定条件下出现凝集。凝集反应中