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光子计数成像探测系统研究 弱光成像技术已经广泛应用于生物科学研究中，是分析生物弱光结构的有效方法。生物超微弱发光与生物的许多功能和生理过程都有关系,可反映生物体代谢过程的变化。所以国内外的生物学家和医学专家已经把生物微弱发光作为研究生物过程和临床诊断的一个重要手段.由于生物发光是一种超微弱发光,发光微弱到10-16W以下,是一种不连续的光子流,所以人们用肉眼觉察不到.若想获得生物的发光图像,需要非常灵敏的弱光成像技术. 本文设计并研制的光子计数成像系统是以光子成像头、高帧频CCD为主要器件的超微弱光成像系统,可以探测到10-16W的微弱光,是一个高效的超微弱光成像系统装置。在生命科学中,可用来开展很多有意义的研究工作,例如用于解决光漂白、照射损伤及试剂间的生物干扰等实际问题. 1 光子探测系统 入射到光电探测器上的光束是由大量光子组成的光子流。如果采用光电倍增管作为接收器,在光照下,从倍增管的光阴极释放的一个电子在管内电场作用下运动至阳极,在阳极的负载电阻上将会出现一个光电子脉冲。在一般光照下,入射光子数很多,光电子脉冲互相叠加,使光电倍增管输出很高的直流电平;当入射光功率逐渐减弱时,光电子脉冲的叠加逐渐减小,光电倍增管的输出直流电平逐渐下降,光电子脉冲愈来愈分离;当入射光功率减小到10-16W时,光电探测器上的光电子脉冲呈现出不连续的随机分布。对这种随机出现的光电子脉冲只能对其进行计数统计。 根据光强度与光电探测器时间-空间特性的不同关系,光电探测可分为两种探测模式:模拟探测模式(测量的光强是多个光子叠加的能量)和单光子计数模式(输出信号是被计数的某个光子)。如果光电探测器有较好的时间-空间特性,用光子计数统计可实现微弱光探测。常规的弱光成像器件没有单光子计数模式,所以探测不到极微弱光信号。 光子计数成像主要有三个优点:①超高灵敏度探测;②良好的定量特性;③可获得单光子时间-空间信息。 单光子成像是用带两级微通道板的增强管,即光子成像头来获得,结构如图1所示。微通道板的单通道直径大约10μm,通道有电子倍增功能。当学图像聚焦点在光子成像关的光阴极时,光子就激发出光电子。光电子图像被聚到微通道板表面,在两极微通道板内,光电子图保持位置信息不变,信号幅度被放大106倍后,撞击到荧光屏上。经过这些过程,甚至单个光子也能在光子成像头上产生大约108个光子的输出。单光子产生的高密度光斑,能容易地被后继的成像器件探测到。这样,就实现了单光子成像。 2 系统的主体及原理 图2表示了由光子成像头、耦合透镜组、高帧频CCD摄像机、图像采集系统与计算机等组成的光子计数成像探测系统。 工作时,样品发出的极弱的光子图像被光子计数成像头接收,经增强放大后,显示在光子成像头的荧光屏上,由耦合透镜组输入到CCD面上,通过图像采集系统存入计算机。为了对极弱入射光强进行监测,加入一路标定系统,它由光子计数型光电倍增管及光子计数器构成。整个系统由计算机进行控制、标定、数据后处理、图像分析及显示。 光子计数成像探测系统的主要结构单元: ① 光子计数型像增强器---光子成像头,它由光阴极、二级微通道板和荧光屏组成。其光谱响应范围为280～850nm,且具有较高的辐射增益、较低的暗噪声以及良好的荧光屏弛豫时间。 ② CCD摄像机采用高帧频CCD,其像元数为128×128,帧频为800Hz,成像分辨率力为15lp/mm。 ③ 图像采集系统,为了对极微弱的光图像进行探测,要采集多帧图像进行叠加,才能得到生物的发光图像。图像采集系统能自动、快速地把高帧频CCD摄像机输出的128×128的面阵图像转换成数字量存储,并输入到计算机中进行数据处理。 ④ 系统性能:入射光强小于104光子/(mm2.s)或光阴极处的照度小于10-6lx时,具有单光子成像计数能力;系统信噪比为10:1.此系统在照度小于10-2lx时,亦可用于多光子模拟成像模式。 3 模拟探测模式下的光子数 应用以上系统对一植物的叶子进行了荧光延迟发光的探测。图3中给出了图像质量对光子计数数量的依赖。图3a上探测的光子数为83个;图3b上探测的光子数为797个;图3c上探测的光子数为2052个;图3d是在模拟探测模式下用弱照明获得的。可以看出在单光子计数模式下,叠加的光子数越多,叶子的形状越清晰。 实验条件:将光子成像头冷却至-10℃。 4 实时光子成像和图像分析 本文描述了一个新的光子计数成像探测系统及其应用。这一系统可以对非常微弱的发光物体进行实时光子计数成像,然后再进行图像分析。本系统还可用于很多需要高灵敏探测的领域,如天文、生物、化学、大气分析等。