黄芩苷对结核分枝杆菌体外抑菌试验研究.docxVIP

黄芩苷对结核分枝杆菌体外抑菌试验研究 蠕虫是一种慢性疾病。中国是受严重疾病影响的国家之一，排名第二。目前治疗结核病的新药较少,临床仍采用多种抗结核药物联合的化疗方案。药物不良反应大,影响患者的依从性。中药黄芩的提取物黄芩苷具有保护肝脏、抗菌消炎、抗病毒等作用。本文旨在研究黄芩苷对结核分枝杆菌的抑菌作用,了解其治疗结核病的可行性。 1 材料和方法 1.1 人型方向混合菌的筛选 黄芩苷(C21H18O11),纯度90.5%,购自山东省诸城市浩天药业有限公司;37株结核分枝杆菌为天津海河医院2009年1月—2010年1月结核患者标本培养所得菌株,经鉴定为人型结核分枝杆菌;质控菌为结核分枝杆菌标准菌株H37RV,购自中国药品生物制品检定所。其中对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)均敏感的19株,对INH低浓度耐药(1 mg/L)的8株,对RFP低浓度耐药(50 mg/L)的6株,对EMB低浓度耐药(5 mg/L)的5株。其中同时耐INH和EMB的1株。 1.2 菌落生长情况观察 按照参考文献中改良罗氏培养基的制作方法,配制浓度梯度为48、24、12、6、3、1.5、0.75及0.375 g/L的含黄芩苷培养基,将结核分枝杆菌菌悬液接种于不同浓度的含药培养基,37℃温箱孵育4周,观察菌落生长情况。 1.3 最低药物浓度 以绝对浓度法判断结果。以培养皿无菌落生长的最低药物浓度为黄芩苷对该菌株的最低抑菌浓度(MIC)。计算药物对90%菌株的MIC(MIC90)、MIC75和MIC50。 1.4 统计方法 利用SPSS16.0软件进行分析。对不同耐药类型菌在不同MIC值的数量分布采用三次方曲线拟合模型分析。 2 mic菌株数量 黄芩苷对37株结核分枝杆菌临床分离株的MIC90为12 g/L,MIC75和MIC50均为6 g/L。最低MIC为1.5 g/L,最高48 g/L。37株结核分枝杆菌的黄芩苷抑菌实验显示,48、24、12、6、3、1.5、0.75及0.375 g/L MIC的菌株数(%)分别为1(2.7)、0、6(16.22)、15(40.54)、11(29.73)、4(10.81)、0及0株。 全敏感菌株在MIC为6 g/L时数量比例最大,随着MIC值向两侧递减,见图1A;INH低耐菌株组与MIC变化并明显著关联,见图1B;EMB低耐菌株数量随着MIC由低到高的变化而显著增多,见图1C;RFP低耐菌株数量随着MIC由低到高的变化而逐步减少,见图1D。37株结核分枝杆菌的黄芩苷抑菌实验结果及不同耐药类型菌的MIC分布和比例,见表1。 3 抗结核药的作用 结核病是全球第二大仅因单个感染因素而导致死亡的疾病,已经成为威胁公共卫生的一项长期挑战。随着抗结核药的广泛使用,结核菌的耐药现象越来越严重,耐多药结核、广泛耐药结核给结核病的治疗带来了困难。我国第四次结核病流行发现结核菌总耐药率为27.8%,耐多药率为10.7%。硝基咪唑类化合物PA-824、二芳基喹啉类化合物TMC207(R207910)、吡咯类化合物BM212等均有较好的抑制结核分枝杆菌的作用,但目前大多处于实验研究阶段,尚未能应用于临床。传统的植物药具有天然易获取,不良反应少等优点,但这些植物提取物体对结核分枝杆菌的MIC差异较大,如一种杧果姜提取物对结核分枝杆菌的MIC为500 g/L,3种细齿水蛇麻提取物对结核分枝杆菌的MIC分别为42、18及30 g/L,琼楠提取物对结核分枝杆菌的MIC50为28.9 g/L,3种屏东花椒提取物对结核分枝杆菌的MIC分别为52.4、55.6和45.8 mg/L。 研究已证实黄芩苷对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、乙型链球菌以及葡萄球菌具有抑制作用。本研究显示,黄芩苷对37株临床结核分枝杆菌均有抑制作用,最低MIC为1.5 g/L,最高48 g/L。该结果与文献报道的黄芩苷对临床常见病原菌的MIC范围为0.1~50 g/L结果相近。拟合曲线关联性研究显示,INH低耐菌株的数量与MIC值无明显关联,而大多EMB低耐的菌株则需要较高浓度的黄芩苷才可抑制其生长,表明EMB的临床抗性株对于黄芩苷也存在一定程度的抵抗作用,2种药物的作用位点可能相同,或机制存在相似之处。RFP低耐菌株大多可以被较低浓度的黄芩苷抑制,表明RFP的临床耐药菌株对于黄芩苷较敏感,2种药物的作用机制可能互不影响,也提示耐RFP的菌株可能较耐EMB的菌株对黄芩苷更敏感。 综上所述,黄芩苷对结核分枝杆菌具有一定的抑菌作用。其抗结核菌作用虽然不如化合物强,但如能与现有抗结核化疗药物联合使用,将发挥其不良反应小、并兼有保肝作用的优势。但本研究结论尚需更大样本和增加抗结核化疗药联合抑菌实验的研究加以证实。 2.1 每个菌株的抗菌浓度都是试验的结果 2.2 曲