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分光光度法测定麻叶中绿原酸的含量 大麻是中国的特产，在国际上被称为“中国草”。它在传统医学中具有重要的药用价值。我国民间利用苎麻治疗疾病的历史悠久。现代药学研究表明,苎麻叶具有丰富的药用和保健价值成分。特别是绿原酸(图1)具有利胆、抗菌、降压、增高白血球及兴奋中枢神经系统等多种药用功能。 目前,绿原酸的分析方法主要采用高效液相色谱法[2～4],分析仪器昂贵,操作过程繁杂,对绿原酸的分光光度法测定未见详细报道。本研究在绿原酸与亚硝酸钠-氢氧化钠的显色反应基础上,对影响绿原酸定量分析的有关条件进行了研究,摸索出一种可行的定量测定绿原酸含量的方法。 1 实验部分 1.1 标准品溶液的配制 756-MC紫外-可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)。Explorer全自动电子天平(瑞士OHAUS公司)。 绿原酸标准品购自中国生物制备研究所,纯度为99.5%。精确称取0.0100 g绿原酸标准品,用甲醇溶解,50 mL容量瓶定容,配成0.2000 g/L的标准品溶液。 12.5%醋酸溶液,7%尿素溶液,0.5%亚硝酸钠溶液,5%氢氧化钠溶液均为自行配置。其它试剂均为分析纯。水为二次蒸馏水。苎麻叶5月份采自湖南宁乡,50℃烘干,粉碎备用。 1.2 亚硝酸钠溶液的制备 量取适量绿原酸样品液(相当于0.01～0.12 g/L的绿原酸)于5 mL比色管中,水浴蒸干甲醇,然后加入0.5 mL水,0.1 mL 12.5%的醋酸溶液,2.0 mL 7%的尿素溶液,0.25 mL 0.5%的亚硝酸钠溶液混合均匀,3 min后加入0.5 mL 5%的氢氧化钠溶液及水。于510 nm处测定吸光度,以水为空白,进行条件实验和样品分析。 2 结果与讨论 2.1 体系的吸光光谱 分别取1.0 m L及1.5 m L绿原酸标准溶液,按[1.2]中方法显色,以水为空白,测量体系的吸光光谱,结果见图2。绿原酸显色后溶液在510 nm处有一特征吸收峰,因此比色分析在510 nm处测定溶液的吸光度。 2.2 显色温度和时间的影响 取1.0 m L绿原酸标准溶液,按[1.2]方法测定绿原酸在不同温度下显色后的吸光度值。结果表明,温度对吸光度值影响不大(见图3),故本法选用室温。 取1.0 m L绿原酸标准溶液,在室温下进行显色,测定不同显色时间的吸光度,结果见图4。从图4中可看出,显色反应体系稳定,10 min后体系吸光度值稍有减小,故本实验定容后5 min开始测定吸光度。 2.3 检测用量示明 分别吸取0.6 mL绿原酸标准品于七个5 mL的比色管中,水浴蒸干甲醇,各加入0.5 mL水,0.025 mL,0.050 mL,0.075 mL,0.100 mL,0.125 mL,0.150 mL,0.175 mL 12.5%的醋酸,以下操作同[1.2]实验方法。显色后,用石英比色皿在510 nm处测定吸光度。醋酸用量与吸光度的关系见图5。 实验表明,醋酸的用量对吸光度的影响很大,在0.1 mL时吸光度最大,故实验选用12.5%的醋酸0.1 mL。 2.4 尿素溶液加入量 分别吸取0.6 mL绿原酸标准品于七个5 mL的比色管中,水浴蒸干甲醇,各加入0.5 mL水,0.1 mL 12.5%的醋酸,再分别加入0.5 mL,1.0 mL,1.5 mL,2.0 mL,2.5 mL,3.0 mL,3.5 mL 7%的尿素溶液。以下操作同[1.2]实验方法。显色后,用石英比色皿在510 nm处测定吸光度。尿素用量与吸光度的关系见图6。结果表明,尿素用量在1.5～3.5 mL范围内,吸光度值最大且恒定。实验选用2.0 mL。 2.5 亚硝酸钠用量的确定 分别吸取0.6 mL绿原酸标准品于六个5 mL的比色管中,水浴蒸干甲醇,各加入0.5 mL水,0.1 mL 12.5%的醋酸,2.0 mL 7%的尿素溶液,再分别加入0.05 mL,0.10 mL,0.15 mL,0.20 mL,0.25 mL,0.30 mL 0.5%的亚硝酸钠溶液。以下操作同[1.2]实验方法。显色后,用石英比色皿在510 nm处测定吸光度。亚硝酸钠用量与吸光度的关系见图7。结果表明,亚硝酸钠用量在0.20～0.30 mL范围内,吸光度值最大且恒定。实验选用0.25 mL。 2.6 naoh用量的确定 分别吸取0.6 mL绿原酸标准品于七个5 mL的比色管中,水浴蒸干甲醇,各加入0.5 mL水,0.1 mL 12.5%的醋酸,2.0 mL 7%的尿素溶液,0.25 mL 0.5%的亚硝酸钠溶液,混合均匀,3 min后再分别加入0.1 mL,0.2 mL,0.3 mL,0.4 mL,0.5 mL,0.6 mL,0.7 mL 5%的氢氧化钠溶液,以水定容显色后,用石英比色皿在510 nm处测定吸光度。NaOH用量与吸光度