以浓硫酸为显色剂测定黄山药中薯皂苷元的研究.docxVIP

以浓硫酸为显色剂测定黄山药中薯皂苷元的研究 甘薯糖元的化学名称为5异螺旋3-醇，属于异螺旋醇衍生物，是甘薯科甘薯属植物根的甘薯糖元的水解产物。如图1所示，结构。薯蓣皂苷元以糖苷的形式广泛地存在于自然界的植物中,具有雌激素、降低胆固醇、止咳、怯痰、脱敏、恢复病变组织及刺激肝素细胞生长与胆汁分泌的作用,常被用作甾体抗炎药(如地塞米松等)、性激素(如黄体酮、睾酮等)、女用避孕药(如炔诺酮、炔雌 醇等)的半合成原料,是医药工业的重要原料。其本身还有肝脏保护、抑制癌细胞增殖、治疗骨质疏松、抗糖尿病和消炎等功能。近年来,又发现薯蓣皂苷元具有去脂、延缓衰老和治疗某些皮肤炎症的功效,成为化妆品业的新生力量。 薯蓣皂苷元测定方法最常用的有高氯酸—香草醛—冰醋酸反应的比色法、重量法和熔点法。由于不同品种的提取产物中杂质的种类及其含量分布不同,其重量和熔点变异性大,后两种方法的准确性不高,而高氯酸—香草醛—冰醋酸比色法操作比较繁琐。目前测定的方法有薄层扫描法、气相色谱法、高效液相色谱法和分光光度法,但前三者的操作繁琐,且对仪器的要求较高,应用有一定的局限性。蒋朝辉等(2001)报道了薯蓣皂苷元的分光光度法,但分光光度法显色剂的显色条件及其主要影响因素尚未见报道。本文首次对以浓硫酸为显色剂测定黄山药中薯蓣皂苷元的分光光度法进行了系统的试验研究。 1 测试方法 1.1 药品、化学品、三氯甲烷 TU-1900双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);BS124S型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);KQ-250B型超声波清洗器(江苏省昆山市超声仪器有限公司)。 对照品薯蓣皂苷元(中国药品生物制品鉴定所,批号1539-200001);浓硫酸(95%～98%,成都市欣海兴化工试剂厂);三氯甲烷(成都市联合化工试剂研究所);试剂均为分析纯。 黄山药(Dioscorea panthaica),来自西南科技大学生命科学与工程学院种质资源圃。 1.2 对照溶液的制备 精确称取1对照品5.0 mg,在25 mL容量瓶中加入三氯甲烷溶解并定容,摇匀,作为0.2 mg/mL对照品溶液备用。 1.3 浓硫酸对冰水浴温度的影响 精确吸取0.5 mL对照品溶液置于10 mL具塞试管中,挥干溶剂,加入10 mL浓硫酸,置于50 ℃水浴锅中保温30 min,取出后在冰水浴中冷却4 min,在150～250 min内测定。以浓硫酸为空白对照,于300～600 nm范围内扫描(图2)。最大吸收波长(λmax)为410 nm。 1.4 浓硫酸水浴冷却 吸取0.5 mL对照品溶液于10 mL具塞试管中,挥干溶剂,加一定量浓硫酸,置一定温度水浴中保温一定时间,取出在冰浴中冷却4 min。以浓硫酸为空白对照,在410 nm处测A,确定最佳显色条件。 2 结果与讨论 2.1 最佳测量条件的确定 2.1.1 显色反应的次数 精确吸取对照品液0.5 mL,按“1.3”的方法,在不同水浴温度下进行显色反应,分别在380～600 nm范围内扫描结果见表1。表1资料表明,水浴温度在40～50 ℃时,λmax变化不大;当温度大于60 ℃时,吸收光谱明显蓝移;当温度在50 ℃时A最大。 2.1.2 显色时间的确定 精确吸取对照品液0.5 mL,按“1.3”的方法,经不同时间的显色反应后测定,结果见表2。表2资料表明,显色反应30 min时A最大,即显色反应的最佳时间为30 min。 2.1.3 水浴中显著显色反应 精确吸取对照品液0.5 mL,加入不同量的浓硫酸后,按“1.3”的方法,在50℃水浴中显色反应30 min,于410 nm处测定A,结果见表3。结果表明,浓硫酸加入量为10 mL时,A最大。 试验表明,最佳显色反应条件为:浓硫酸10 mL,于50 ℃水浴中显色反应30 min。 2.2 显色体系的稳定性 精确吸取对照品液0.5 mL,按最佳显色条件进行反应后,分别于0～300 min内测定A,结果见图3。图3表明:显色体系在150 min内A不稳定;在150～250 min内A变化不大;超过250 min后,A明显下降。 2.3 最佳显色条件aa 分别精确吸取对照品液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3、1.5 mL,按“1.3”的方法,采用最佳显色反应条件进行反应,测定A(每个点重复5次)。以对照品液浓度的平均值为横坐标,A为纵坐标绘制标准曲线。得回归方程为:A=0.0267C+0.0493,r=0.9996。表明薯蓣皂苷元含量在2～30 μg /mL范围内与A呈良好的线性关系。 2.4 最佳显色条件的确定 称取干燥后的(60 ℃,3 h)黄山药粉末(过65目筛)1.00 g,置锥形瓶中,加甲醇50 mL,超声处理(250 W,40 kHz)30 min后