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高效液相色谱分析方法的应用 1 2、如果 1.1 高效液相色谱 色度法是一种分离混合物的技术。这是由1913年的俄罗斯植物学家兹比特在实验中发现并命名的。将植物叶色素的石油醚提取液通过装有白色的碳酸钙颗粒的玻璃管, 然后用石油醚进行冲洗, 结玻璃管内出现了不同颜色的色带。并且随着冲洗剂的流动, 不同的色带以不同的速度向下移动并分离。色谱法由此得名。装在柱内的填充剂被称为固定相 (也叫载体) , 冲洗剂则被称为流动相。 高效液相色谱 (HPLC) 于20世纪70年代获得迅猛发展而成为一种常规高效分离分析技术, 是目前各种色谱模式中应用最广的一个领域, 在化合物的分析方面, 世界上约有80%的化合物, 如括高分子化合物、离子型化合物、热不稳定化合物以及有生物活性的化合物都可以用不同模式的HPLC (如正相HPLC、反相HPLC、离子交换色谱和离子色谱、体积排除色谱、亲合色谱等等) 进行分离分析。因此, 自80年代以来HPLC成为国际分析化学界发展最快的一个分支, 无论是仪器的销售额, 还是论文的发表数, 均雄居同期所有分析仪器的首位, 在很多学科领域内都得到了广泛的应用。由此可见液相色谱仪近代的发展道路上创造了无数的辉煌, 也帮助人类解决了不少的难题。 1.2 高效液体层析成像的结构和原理 1.2.1 高效液相色谱检测技术 高效液相色谱仪 (HPLC) 一般由输液系统 (储液器、泵、进样器) 、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。制备型仪器还需配有馏份收集系统。为了取得较好的分析结果, HPLC仪器对于准确度、精确度、灵敏度及结果重现性有较高的要求。 (1) 输液系统 输液系统要为HPLC仪器提供流量恒定、准确、无脉冲的流动相, 流量的精度和长期的重复性要好, 同时还要提供精度好、准确度高、重现性好的多元溶剂梯度。 (2) 色谱柱 色谱柱通常为不锈钢柱, 内装各种填充剂。常用的填料为硅胶, 可用于正相色谱;化学键合固定相, 根据键合的基团不同, 可用于反相或正相色谱。其中、最常用的是十八烷基键合硅胶, 即ODS柱, 可用于反相色谱或离子对色谱。 (3) 检测器 检测器用于连续检测色谱柱流出的物质, 进行定性定量分析。要求其灵敏度高、噪音小、基线稳定、响应值的线性范围宽等。近年来各国都在研究开发新的检测技术, 进一步扩大了HPLC的应用。根据检测需要的不同检测器可分为紫外检测器 (UVD) 、示差折光检测器 (RID) 、电化学检测器 (ECD) 、红外检测器 (IRD) 、核磁共振检测器 (NMRD) 、质谱检测器 (MSD) 、蒸发光散射检测器 (ELSD) 、小角度激光散射检测器 (LALLSPD) , 目前高效液相色谱仪的通用型检测器很少, 而且灵敏度较低, 但选择性检测器很多, 而且灵敏度较高。解决的办法是将各种检测器联用, 合理的提高检测的广泛性。 1.2.2 两相分离和网相分离的测定法 储液器中的流动相被高压泵打入系统, 样品溶液经进样器进入流动相, 被流动相载入色谱柱 (固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附-解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪, 数据以图谱形式打印出来。 2 高效液相色谱法的应用和发展趋势 2.1 高效液体层析成像-对原油的利用 2.1.1 高效液相色谱法 以往, 在石油化工、农药、环保等方面, 经常采用薄层色谱法 (TLC) 和气相色谱法 (OC) 进行含量测定, 而液相色谱法 (LC) 只是用于对组分标样的测定和分离的可能性的研究。可是, 到六十年代末期, 现代液相色谱法已经成为一种标准的分离分析方法。自七十年代以来, 我国就有数家科研部门以及工厂前后研制并生产了液相色谱仪。LC开始在我国许多科学领域进入了实用阶段, 尤其是对那些热稳定性差或蒸气压低的样品组分的分析, 更显示了LC的优越性。近几年来, HPLC在油品分析, 尤其是在石油中多环芳烃、重质烃的测定方面取得了突破性的进展。 苟爱仙等以正己烷、二氯甲烷为流动相, 用多维高效液相色谱技术及适宜的梯度淋洗条件, 实现了渣油各烃族良好的分离和检测。Keller等利用反相HPLC分离制备了润滑油中抗氧剂苯基-l萘胺、4, 4, 7-二辛基二苯胺及其氧化产物, 并用MS定性和GC定量。Grosset等采用5μm C18柱分离, 水ue000甲醇梯度洗脱, 电化学检测器检测, 分离分析了润滑油中12种抗氧剂, 该方法的检测限可低达ng级。张大伟建立了HPLC结合蒸发光散射检测 (ELSD) 技术快速测定VGO馏分油烃族组成的新方法。钱华等同样用HPLC对润滑油基础油的化学族