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叶酸受体介导的靶向给药系统研究进展 肿瘤的发病率逐年增加，已成为一种严重影响人类健康的常见疾病。化疗作为肿瘤治疗的手段之一,在恶性肿瘤的治疗过程中发挥着不可替代的作用。传统抗癌药物的主要缺点在于抑制肿瘤细胞生长的同时也抑制了正常细胞的增殖从而引起严重的副反应,因而药物的靶向治疗引起人们的关注。叶酸受体(folate receptor,FR)介导的靶向给药系统是利用肿瘤细胞和正常细胞表面FR表达的差异性,特异性结合肿瘤细胞表面高表达的FR,来实现叶酸结合物的靶向传递,从而减少药物治疗癌症时对正常细胞的损害,是目前药物靶向运输的研究热点。本文就近年来FR介导的靶向给药进行了综述。 1 frfr 叶酸作为水溶性维生素B家族中的成员之一,存在于许多蔬菜中,最初由菠菜中分离得到。由于叶酸相对分子质量(Mr)小、易于修饰和穿透肿瘤细胞、免疫原性低,因而具有到达靶点时间短、血液清除速度快、穿透力强、人体免疫反应低等优点。 FR是一种糖基化磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidyl inositol,GPI)连接的膜糖蛋白,Mr为38 000~40 000,是可以介导细胞内吞,将叶酸摄入真核细胞胞浆的一种高亲和力受体。FR在某些肿瘤细胞表面高度表达,而在正常组织无或很少表达,因而具有良好的肿瘤组织特异性。近年来FR在药物靶向运输、癌症及风湿性关节炎的免疫疗法等领域中的研究受到广泛关注。 FR有三种异构单体: FRα、FRβ和FRγ。FRα在卵巢癌、结直肠癌、子宫内膜癌、睾丸癌、脑瘤、肺腺癌等上皮细胞系肿瘤中高水平表达。由于在正常组织和同种来源的肿瘤组织中表达水平有显著性差异,后者的表达水平比前者几乎高出2个数量级; FRβ经常高表达于非上皮组织来源的肿瘤细胞表面,如肉瘤和急性髓细胞白血病,FRβ成为FR介导的髓细胞白血病靶向治疗的潜在靶标; FRγ在正常的血清中检测不到,可以作为淋巴瘤中血清标记物。 2 亚甲基四氢物应激活剂 FR介导的靶向给药系统常以叶酸或叶酸类似物为载体,将放射性核素、抗肿瘤药物、基因药物与之偶联,实现靶向输送药物的作用。常用的叶酸类似物主要有:5-甲基四氢叶酸、5-甲酰基四氢叶酸、磺胺、甲氨蝶呤、5,10-亚甲基四氢叶酸等。 FR在肿瘤细胞表面高度表达,而在正常组织中的表达却高度保守。基于这种表达差异,可以实现叶酸-药物偶联物的主动靶向运输。叶酸-药物偶联物与肿瘤细胞表面的叶酸受体特异性结合后,形成叶酸-药物与FR复合物,通过内吞作用进入肿瘤细胞形成独立的内吞体。由于离子泵的作用使内吞体的pH值由7下降到5,叶酸-药物与FR复合物的构象改变,药物解离下来,进入细胞内,而FR重新回到细胞表面,循环转运药物。研究表明,癌细胞表面FR的表达数目直接影响到叶酸-药物复合物与之结合并内吞的数目,一般来说,一个癌细胞每1 h大约能够内吞(1~2)×105个叶酸-药物复合物分子。因此,可以利用这种内吞作用进行肿瘤的靶向治疗研究。 3 药物靶向运输载体 FR靶向制剂在肿瘤显像和标识、基因治疗、免疫治疗、关节炎治疗及药物靶向传递中发挥着重要作用。其中由叶酸介导的药物靶向运输载体主要有两类。一类是叶酸-分子复合物如叶酸-蛋白毒素,但是由于多数叶酸复合物的体积较大,不易达到肿瘤细胞和被肿瘤细胞摄取,故常用纳米级的叶酸偶联物作为叶酸受体介导的靶向给药载体,如脂质体、胶束、纳米粒、乳剂、树枝状聚合物、超分子囊泡状聚合物等。 3.1 过度表达的肿瘤细胞 传统脂质体载药技术因缺乏主动识别过程,其组织选择性低,靶向性不理想。叶酸脂质体作为抗癌药物主动靶向载体,除具有一般脂质体的共同特点外,还显示出良好的肿瘤细胞主动靶向性。 脂质体表面用聚乙二醇(PEG)修饰可以增加脂质体的稳定性、延长循环时间,叶酸修饰的脂质体可以扩大可接受的配体范围,提高对肿瘤组织的靶向性。Wu等制备的叶酸修饰PEG化紫杉醇脂质体,不仅能够降低处方中聚氧乙烯蓖麻油带来的毒性、延长循环时间,而且还可以靶向FR过度表达的肿瘤细胞。小鼠体内的药代动力学试验显示,靶向PEG化的紫杉醇脂质体与非靶向PEG化紫杉醇脂质体的血浆半衰期分别为12.33和14.23 h,而以聚氧乙烯蓖麻油为佐剂的游离紫杉醇注射制剂的血浆半衰期为1.78 h,说明PEG的引入使得脂质体的循环时间延长。靶向PEG化的紫杉醇脂质体的血浆清除率(0.75 mL/h)大于非靶向PEG化紫杉醇脂质体的血浆清除率(0.41 mL/h ),说明经叶酸修饰的脂质体能够快速被肿瘤细胞摄取。另外,体外对人口腔癌细胞的细胞毒性试验表明,叶酸修饰的紫杉醇脂质体比非靶向的脂质体毒性高3.8倍,说明该制剂能有效地靶向肿瘤细胞。 闫颖等制备了一种FR靶向的阳离子脂质体,以荧光素标记的阴离子葡聚糖(DFA)为模型药物,并加入长循环修饰剂