第十五章基因工程现代遗传学.pptVIP

ELISA检测技术：ELISA（enzyme linked immuno-sorbent assay）是一种固相免疫检测技术。比较常用的方法有用于检测抗原的双抗体夹心法和用于检测抗体的间接法两种。因此，基因工程中用于检测克隆基因表达产物的方法主要是双抗体夹心法。 优点：能进行定量检测，因此该方法更多地用于基因表达产物的定量分析。 缺点：较繁琐。基因必须表达。 本文档共132页；当前第95页；编辑于星期三\14点21分 本文档共132页；当前第96页；编辑于星期三\14点21分 分子杂交技术检测法：包括菌落或噬菌斑的原位杂交技术。 优点：方法简便、快速。 缺点：必须具有相应的探针。 杂交抑制翻译法：该方法用于cDNA文库中目的基因的筛选。其原理是利用cDNA与mRNA杂交后导致mRNA的不能翻译，从而筛选阳性克隆子。 优点：不需要克隆基因的表达，不需要探针或抗体。 缺点：较烦琐。 DNA序列分析：该方法通常是用在目的基因筛选后最终的鉴定。 本文档共132页；当前第97页；编辑于星期三\14点21分 各克隆子提取相应的cDNA 从cDNA文库相应的细胞提取mRNA 混合杂交 无细胞翻译体系（麦胚或网织红细胞提取物）体外翻译 35S标记甲硫氨酸 聚丙烯酰胺凝胶电泳