实验用斑马鱼质量控制第3部分：繁殖与保种技术规范.pdfVIP

繁殖与保种技术规范 1. 范围 本标准规定了实验用斑马鱼在实验室中自然繁育的具体流程和实验用斑马鱼的体外受 精。 本标准适用于普通级实验用斑马鱼的繁殖与保种。 2. 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适 用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 14923-2022 实验动物 遗传质量控制 GB/T 39649-2020 实验动物 实验鱼的质量控制 DB11/T 1053.3-2013 实验用鱼 第 3 部分：遗传质量控制 3. 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 受精后X天（X Day post fertilization, Xdpf）：以受精时为0dpf，Xdpf指实验用斑 马鱼受精后X天（X代表数字），通常以“dpf”为单位描述实验用斑马鱼受精卵的日龄。 3.2　体外受精（ In Vitro Fertilization）：精子和卵子在体外结合产生配子的一种受精方 式。 4. 实验用斑马鱼在实验室中自然繁育的具体流程 1 4.1 实验动物准备 4.1.1 繁殖操作前一天，选取体型正常、外形健康的成熟实验用斑马鱼雌鱼 （腹部膨大体 型丰满）、雄鱼 （腹部扁平体型细长，体色偏黄）。 4.1.2 以随机配对的方式将雌鱼和雄鱼放入配种缸，每缸按 1:1 或 2:1 比例放置雌鱼和雄 鱼。配种缸中间以隔板隔开雌鱼与雄鱼。 4.1.3 将配种缸放置在鱼房养殖环境下，正常作息，避免光过夜。 4.2 繁殖 4.2.1 鱼房光照周期恢复后的半小时内，抽取配种缸内的隔板。实验用斑马鱼交配期间， 尽量避免干扰。 4.2.2 产卵后，用 180μm 孔径的过滤网收集外缸底部的鱼卵，用养殖水清洗鱼卵 2-3 次。 4.2.3 将胚胎放于装有养殖水的平皿内，贴标签 （记录亲本鱼系名称、收卵日期等）。以直 径为 90mm 的平皿放置约 50 个鱼卵为宜。 4.3 胚胎（1-4dpf）的养殖 4.3.1 可盛养于装有亚甲基蓝 （0.5mg/L）养殖水的平皿中，避免霉菌生长。 4.3.2 将装有胚胎的平皿置于设有光照周期的 28.5℃恒温培养箱中，每天吸出未受精的鱼 卵或胎膜。 2 4.3.3 无需喂食。 4.4 幼苗期（5-15dpf）的养殖（重要环节） 4.4.1 5dpf 时，将平皿内幼鱼整体移入幼苗养殖缸（贴好标签），养殖密度约为 50 尾/L。 4.4.2 静水养殖。 4.4.3 以草履虫为主要饵料，幼苗粉末饲料为辅，每日投喂 3-4 次。其中，草履虫的投喂 次数不低于每日 2 次，投喂量以投喂后草履虫密度大于 100 个/mL 为宜；严格控制粉末饲料 投喂量，及时吸 过量残渣。 4.4.4 12dpf 后，每日可适当加入活饵丰年虫。 4.5 幼鱼期（16-30dpf）的养殖 4.5.1 将鱼转移至 3L 鱼缸（贴好标签），养殖密度小于 30 尾/缸，鱼缸中插入鱼苗网格 （40 目以上）。 4.5.2 采用滴水法换水养殖，以 100 滴左右/min 进水为宜。 4.5.3 每日投喂 2-3 次丰年虫，投喂量以十五分钟内吃完为宜。投喂前关闭水阀。可每日搭 配一次人工合成的幼鱼粉末饲料进行投喂。及时清理未吃完的食物残渣。 4.6 幼鱼后期（31-90dpf）的养殖 3 4.6.1 幼鱼已具备良好的游泳能力，将幼鱼分缸（贴好标签），每缸密度不超过 10 尾/L， 鱼缸中插入鱼苗网格（20 目）插板。 4.6.2 采取流水法换水养殖，以 10L/h 左右流速为宜。 4.6.3 每日投喂 2-3 次丰年虫，投喂量以二十分钟内可以吃完为宜。投喂前关闭水阀。可每 日搭配一次人工合成的幼鱼粉末饲料进行投喂。 4.7 成鱼 （90dpf）的养殖 4.7.1 三月龄的斑马鱼已成年，具备繁殖能力。将实验用斑马鱼转移至成鱼养殖区（贴好 标签），每缸密度为 5-8 尾/L，鱼缸中插入成年鱼插板。 4.7.2 采取流水法换水养殖。 4.7.3 每日投喂 2 次丰年虫、一次颗粒饲料，投喂量以二十分钟内可以吃完为宜。对于需要 繁殖的种鱼