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ppar激动剂对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗的影响 近年来，非酒精性肝炎（nafd）的发病率逐年增加，不仅在欧洲和美国等工业化国家也有预防病毒性肝炎的趋势。NAFLD发病机制复杂, 目前大多认可由Day和James提出的以胰岛素抵抗 (insulin resistance, IR) 、氧化应激、脂质过氧化为主的“二次打击”学说。以此为切入点, 研发新的治疗药物成为首要问题。过氧化物酶增殖物激活受体 (peroxisome proliferator-activated receptors, PPARs) 属于核受体超家族, 是配体激活的转录因子, 其包括3个亚型, 即PPARα、PPARγ、PPARδ。吡格列酮为PPARγ高选择性激动剂, 能明显改善机体IR, 调节脂质代谢、抑制炎症反应等。由于该类药物有水肿、体质量增加、心力衰竭、肝毒性等不良反应, 临床上在NAFLD治疗应用中受到一定限制。GW501516为PPARδ高选择性激动剂。目前有研究报道, PPARδ激动剂具有调节糖代谢、改善IR的作用, 研究领域涉及2型糖尿病、代谢综合征及冠状动脉粥样硬化症等, 涉及NAFLD的研究报道较少。本研究以PPARγ激动剂吡格列酮为阳性对照药物, 研究PPARδ激动剂GW501516对NAFLD大鼠糖代谢及脂代谢的作用, 并初步阐释激活PPARδ后可能通过哪些信号途径对糖代谢及脂代谢起作用。 1 材料和方法 1.1 免疫药物及检测试剂 SD雄性大鼠购自西安交通大学医学院动物实验中心, GW501516购自美国Santa Cruz公司, 盐酸吡格列酮片购自杭州中美华东制药有限公司, 兔抗大鼠固醇调节元件结合蛋白 (SREBPs-1c) 多克隆抗体及兔抗大鼠葡萄糖转运蛋白-2 (glucose transporter-2, GLUT-2) 多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司, 兔二步法免疫组化检测试剂盒及DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。大鼠胰岛素放免分析试剂盒及大鼠胰岛素样生长因子-1 (IGF-1) 酶联免疫分析试剂盒购自上海源叶生物科技有限公司。 1.3 肝指数和体重指数的计算 肝指数=肝湿重 (g) /体质量 (g) 。体质量指数 (BMI) =体质量 (kg) /体长 (m)2。 1.4 血清生化指数的检测 全自动生化分析仪检测:空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、血清转氨酶、谷酰转肽酶、碱性磷酸酶。 1.5 操作说明 采用空腹胰岛素试剂盒检测, 严格按照试剂盒操作说明进行。胰岛素敏感性稳态模型 (HOMA-IR) =空腹血糖 (mmol/L) ×空腹胰岛素 (m IU/L) /22.5。 1.6 血清igf-1elisa检测 1.7 组织病理学观察 取肝左叶1 cm×1 cm×0.5 cm组织置于含有0.9%氯化钠溶液50ml的广口标本瓶, 以备行肝组织冰冻切片, 油红O染色, 镜下观察:脂滴呈红色, 细胞核呈蓝紫色。另取肝左叶1 cm×1 cm×0.5 cm置于含有10%中性甲醛溶液50 ml的广口标本瓶中固定, 以备肝组织HE染色, 镜下观察:细胞核呈蓝紫色, 胞浆及纤维组织呈深浅不一的红色。 1.8 胞膜的免疫组化 采用二步法试剂盒进行检测。SERBP-1c表达以细胞胞浆呈棕黄色为阳性, GLUT-2表达以细胞膜呈棕黄色为阳性。免疫组化显色程度分:弱、中、强 (+、++、+++) 3种 (记为1、2、3分) ;随机选取5个视野 (400×) , 按显色范围分为:+、++、+++、++++4级 (记为1、2、3、4分) 。显色指数=显色程度×显色范围, 取其均数作为检测指标的最终显色指数。 1.9 均数和计量资料 使用SPSS 13.0软件包进行数据分析, 数据采用ue0af±s表示。多样本均数比较采用方差分析, 组间均数两两比较采用LSD-t检验。非正态分布的计量资料, 采用秩和检验。P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 治疗4周时差异 与正常对照组相比, 模型组、GW501516组、吡格列酮治疗组大鼠的肝湿重、体质量、肝指数及BMI明显增加 (P0.05) , 但GW501516治疗4周时差异无统计学意义 (P0.05) ;与模型组相比, GW501516治疗组肝湿重、体质量、肝指数及BMI均下降, 在治疗4周后更为明显 (P0.05) , 吡格列酮治疗组的肝湿重及肝指数也下降 (P0.05) , 但体质量及BMI无明显变化;在治疗4周后, GW501516治疗组大鼠的体质量和BMI较吡格列酮治疗组低 (P0.05) ;各组大鼠的体长均无明显变化, 差异无统计学意义 (P0.05) (见表1) 。 2.2 gw50155组 正常对照组肝细胞呈条索状