离心机原理和使用 在线阅读.pptxVIP

离心机的原理和使用 验目的： 了解离心机的原理和使用方法 验原理： 借助离心机旋转所产生的离心 , 使不同大小和不同密度的物质分离 途： 细胞的收集 、细胞碎片和沉淀的分 等常用离心分离 速离心技术已成为分离 、 纯化 、 鉴别和 种生物大分子的重要手段之一 2021 1 4/26/2021 2 离心机的种类与用途 速度： ■ 常速（低速） 8000r/min ■ 高速 10000~30000r/min ■ 超速 30000r/min 转子： ■ 固定角转子（Eixed-Angle-Rotor） ■ 主要用于分离沉降速度有明显差异的颗粒样品 ■ 甩平转子（Siwing-Bucket-Rotor） ■ 主要用于样品作密度梯度离心 2021 3 ■ ■ 4/26/ 速离心机 1 常速离心机 8000r/min, R.C.F1*104g 用途： 分离细胞 、细胞碎片 、培养基残 渣及粗结晶等较大颗粒 2021 4 速离心机 2高速离心机 1*104g～2.5*104 r/min ， R.C.F 1*104g 105g 用途： 分离各种沉淀物 、细胞碎片及较 大的细胞器等 高速冷冻离心机 2021 5 超速离心机 ■ 2.5*104g～8*104 r/min ， R.C.F 5*105g或更高 ■ 结构： 离心管帽 、冷冻装置和温控系统 、真 空系统 、安全保护系统 、制动系统 、指示仪 表等。 ■ 按用途分： ■ 制备用超速离心机： 分离纯化生物大分子 、 细胞器和病毒等 ■ 分析用超速离心机： 测定样品纯度（根据紫 外吸收率或折光率等判断） 、沉降系数 、相 对分子量 4/26/2021 6 ■ 沉降系数S： 单位离心力作用下粒子的 沉降速度 ， 以Svedberg表示 ， 简称S 。 1S= 1*10- 13s 4/26/2021 7 ■沉降系数S与分子量M有对应关系 ， 测 出离心机转速 、离心时间和粒子移动距 离 ， 可求出S ， 再得到M 4/26/2021 8 离心方法的选择 对于常速和高速离心机 ， 由于所分离的 颗粒大小和密度相差较大 ， 只要选择好 离心速度和时间 ， 就能达到分离效果 。 超速离心的离心方法： 差速离心 、密度 梯度离心和等密度梯度离心 2021 9 ■ 1 差速离心 ■ 采用不同的离心速度和离心时间 ， 使沉 降速度不同的颗粒分批分离的方法 。 主 要用于分离大小和密度差异较大的颗粒。 4/26/2021 10 品在密度梯度介质中进行离心 ， 使沉 系数比较接近的物质得以分离的一种 带分离方法。 度梯度系统： 梯度介质有足够大的溶 度 ， 不与分离组分反应 ， 不会引起分 组分的凝集 、变性或失活。 用介质： 蔗糖 、甘油等。 品铺在密度梯度溶液表面 ， 离心后形 若干条界面清楚的不连续区带。 2021 11 度梯度离心 2密 样 密 常 样 4/26/2021 12 等密度离心 当欲分离的不同颗粒的密度范围在离心 介质的密度梯度范围内时 ， 不同浮力密 度的物质颗粒在离心力作用下一直移动