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动物细胞制药;;;;;;;;;;;; 血清的质量标准
??? 血清质量高低取决于两方面因素:一是取材对象,二是取材过程。?
?? 理化性质
渗透压、pH值、蛋白电泳图谱、蛋白含量、激素水平、内毒素等。
蛋白含量包括血清总蛋白含量(不低于35-45g/L)、球蛋白含量(应
小于20g/L)、血红蛋白含量等。其中球蛋白含量是一项非常重要的指
标,血清中球蛋白主要是抗体,球蛋白含量越低血清质量越高。血红
蛋白也是越低越好。; 血清的质量标准
微生物检测
包括细菌、真菌、支原体、病毒等。特别是对支原体、病毒的检测
支原体是一种很小的微生物,可通过孔径 22mm 的滤膜。支原体、
病毒污染在光学显微镜下难于察觉,细胞也能生长繁殖,但会影响
实验结果。
检测支原体的方法很多,如培养法、PCR法、荧光染色法、电镜观
察法等。;血清的质量标准
促生长效果 这是血清重要的特性之一,应以培养的细胞来检测
克隆形成率 悬浮生长的细胞,有限稀释法,统计克隆生长百分比
贴瓶率测定 贴壁细胞,集落数占接种细胞数的百分比
续传代培养 细胞培养七天收集细胞,计数,取平均值。连续测试
三个周期以上,观察细胞生长状况。;血清的外观
好的血清应该是透明清亮,土黄色或棕黄色,无沉淀或极少沉淀,比较
粘稠。
如血清浑浊、不透明、含许多沉淀物,说明血清污染或血清中的蛋白质
变性。
若血清呈棕红色,说明血清中的血红蛋白含量太高,取材时有溶血现象
摇晃时感觉液体稀薄,说明血清中掺入的生理盐水太多。;血清的使用与储存
使用前处理
灭活处理,即56℃ 30分钟。灭活的目的使去除血清中的补体成分。??
储存条件
血清一般储存在 -20℃,同时应避免反复冻融。购买大包装的血清后
首先要灭活处理,然后分装成小包装,储存于-20℃ ,使用前融化。
融化时最好现置于 4℃ 。融化后的血清在 4℃不宜长时间存放,应尽
快使用。
??? 使用浓度
自从有了合成培养基,血清就是作为一种添加成分与合成培养基混合
使用,使用浓度一般为5~20%,最常用是10%。;;;三、合成培养基 ;;;;;;;;;;;;;;;;;五、环境和消毒;;;;;;;;;;;;;; 可用于细胞培养的消毒灭菌方法很多,但每种方法都有一定的适应范围。
如常用的过滤除菌系统、紫外照射、电子杀菌灯、乳酸、甲醛熏蒸等手段消毒实验室空气;
多用新洁而灭消毒实验室地面;
常用干热、湿热消毒剂浸泡、紫外照射等方法消毒培养用器皿;
采用高压蒸汽灭菌或过滤除菌方法消毒培养液。;;;;;;;;;;;;;;;;;;
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