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蛋白质和氨基酸的测定;6.1概述;(2)食品中的蛋白质含量;(3)蛋白质系数;不同的蛋白质其氨基酸构成比例及方式不同,故各种不同的蛋白质其含氮量也不同,一般蛋白质含氮量为16%,即一份氮素相当于6.25份蛋白质,此数值(6.25)称为蛋白质系数,;(4)蛋白质水解;(5)蛋白质测定方法;蛋白质含量测定最常用的方法是凯氏定氮法
;蛋白质的测定,目前多采用将蛋白质消化,测定其含氮量,再换算为蛋白质含量的凯氏定氮法。不同食品的蛋白质系数有所不同。;凯氏定氮法:常量法、微量法及经改进后的改良凯氏定氮法;主要学习;
消化反应方程式如下:
使有机物脱水后被炭化为碳、氢、氮。
,将有机物炭化后的碳化为二氧化碳,硫酸则被还原成二氧化硫
2H2SO4+C=2SO2+2H2O+CO2
二氧化硫使氮还原为氨,本身则被氧化为三氧化硫,氨随之与硫酸作用生成硫酸铵留在酸性溶液中。
;在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性,加热蒸馏,即可释放出氨气,反应方程式如下:
;
此法可应用于各类食品中蛋白质含量测定;
样品消化蒸馏、吸收滴定;;(6)测定方法
;②蒸馏、吸收;,冷凝管下端浸入接受瓶液面之下(瓶内预先装有50ml40g∕L硼酸溶液及混合指示剂5~6滴)。
在
;③滴定;
式中W—蛋白质的质量分数,%;
c—盐酸标准液的浓度,mol/L;
V1—空白滴定消耗标准液量,mL;
V2—试剂滴定消耗标准液量,mL;
m—样品质量,g;
0.014—氮的毫摩尔质量,g/mmol;
F—蛋白质系数。
;6.2.2微量凯氏定氮法
;
①???100ml凯氏烧瓶。
②微量凯氏定氮器。;
①???20g/L硼酸溶液。
?②??400g/L氢氧化钠。
③?1g/L甲基红乙醇溶液与1g/L溴甲酚绿乙醇溶液,临用时按1:5混合。
④???0.01000mol/L盐酸标准溶液
⑤???其他试剂同常量法。
;
:样品消化步骤同常量法。将消化完全的消化液冷却后,完全转入100容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀。
;②???蒸馏;,由进样漏斗进入反应室,以少量水冲洗进样漏斗,并流入反应室。再从进样口加入10ml的使呈强碱性,用少量蒸馏水洗漏斗数次,盖塞,进行水蒸气蒸馏。冷凝管下端预先插入盛有10mL4%(或2%))
蒸馏至吸收液中所加的混合指示剂变为绿色开始记时,继续蒸馏10min后,将冷凝管尖端提离液面再蒸馏1min,用蒸馏水冲洗冷凝管尖端后停止蒸馏。;:取下接受瓶,以0.01000mol/L盐酸标准溶液滴定至微红色为终点。;6.2.3样品的分解条件;硫酸钾;硫酸铜CuSO4;
(1)???所用试剂应用配制。
(2)???消化过程应注意凯氏烧瓶,利用冷凝酸液将附在瓶壁上的炭粒冲下,以促进消化完全。
(3)???若样品含脂肪或糖较多时,应注意发生的大量
少量辛醇或液体石蜡,或硅消泡剂,防止其溢出瓶外,并注意适当控制热源强度。
(4)???若样品消化液不易澄清透明,可将凯氏烧瓶冷却,加入300g/L2~3ml后再加热。;(5)???起到催化作用,加速氧化分解。硫酸铜也是蒸馏时样品液碱化的,若所加碱量不足,分解液呈蓝色不生成氢氧化铜沉淀,需再增加氢氧化钠用量。
(6)???若取样量较大,如干试样超过5g,可按每克试样5ml的比例增加硫酸用量。
(7
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