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-淀粉酶抑制剂对糖尿病小鼠的影响

i-淀粉酶抑制剂（i-氨基丙烯酸，a）是一种水解酶抑制剂。天然存在的AI主要有3种类型,分别为:微生物产带一个寡生物胺单位的含氮碳水化合物、微生物产多肽和在谷类、豆类以及其他较高等植物中发现的大分子蛋白质抑制剂。其中,以从小麦中提取的AI活性较高,对胰淀粉酶有更强的抑制作用。成熟小麦中的AI的含量较其他种类植物要高,并且在国内来源广泛。

本实验中所采用的AI属于第三类,是南京工业大学生化中心采用双水相萃取体系的专利技术从小麦粉中分离纯化而来,并对其进行了较深入的研究。小麦中的AI主要由3种相对分子质量不同的蛋白组成,分别为12000,24000,60000。相对分子质量为24000和60000的2种抑制剂都能很好的抑制人类以及很多哺乳动物体内的α-淀粉酶。其中,研究人员对电泳迁移率为0.19的AI(α-AIO.19)的研究最为彻底,其一级和二级结构见图1,2。

由于AI能有效抑制口腔和胃肠道内唾液及胰淀粉酶的活性,阻碍食物中糖类水解和消化,因此其在减肥、降血糖、降血脂方面的作用一直备受关注。目前AI主要作为减肥药进行研究并已应用,但其降血糖的作用在国内未见相关的研究报道。本实验着重观察AI在降血糖方面的生理功能和药理作用,并对其作用机制进行初步探讨。

材料和方法

1试剂和试剂盒

AI(南京工业大学生化中心提供,批号:0050618,提取纯度90%,可抑制淀粉酶酶活为461AU,临用前用蒸馏水配成2mg·L-1的溶液);消渴丸(广州中一药业公司,批号:G01429);葡萄糖(GLU)测定试剂盒(上海荣盛生物技术有限公司,批号:050411);四氧嘧啶(ALX,美国Fluka公司,批号;麦芽糖(上海化学试剂公司,批号:050321);蔗糖(广东台山化工厂,批号z0650);乳糖(上海恒信化学试剂有限公司,批号041207);阿卡波糖(商品名:拜唐平,北京拜耳医药保健公司,批号。TU—1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);超细匀浆器(f8,上海Fluko公司);低温高速离心机(BiofugefrescoHeraeus)。

2我国scxk-4002模型

SD雄性小鼠,18～22g,鼠龄6～8周,由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供,许可证号:SCXK(沪)2003-0002。饲养在二级动物房(温度25℃,12h明暗交替,自由饮水及进食)。

3造模成功小鼠的制备

小鼠禁食不禁水12h,腹腔注射(ip)四氧嘧啶生理氯化钠溶液180mg·kg-1,72h后测定空腹血糖,取血糖值大于11.1mmol·L-1的小鼠为造模成功的糖尿病小鼠。

4小鼠的一般情况

正常小鼠20只,按体重随机分为正常对照组和AI给药组。正常对照组每天灌胃(ig)等体积的生理氯化钠溶液;AI给药组每天igAI45mg·kg-1,连续灌胃21d,每天观察两组小鼠饮水量、摄食量和体重的变化。末次给药后,禁食不禁水12h,取小鼠眼眶静脉血,用葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖含量。

5ai对四氧嘧啶性糖尿病小鼠的影响

5.1血清葡萄糖检测

取糖尿病小鼠60只,按血糖值随机分为6组,即模型对照组、2个阳性药对照组(拜糖平20mg·kg-1,消渴丸352mg·kg-1),AI45,15和5mg·kg-1三个剂量组,其中阳性药对照组和AI组从造模当天起每天21:00ig给药1次,模型空白组则ig同体积的生理氯化钠溶液,连续给药21d后,末次给药并禁食不禁水12h后取小鼠眼眶静脉血,测定血清葡萄糖含量。

5.2igi型淀粉的制备

取糖尿病小鼠30只,按血糖值随机分为3组,即空白对照组、淀粉负荷对照组、AI组。动物禁食不禁水12h后,给药组ig45mg·kg-1AI,淀粉负荷对照组和空白对照组则ig等体积生理氯化钠溶液。给药5min后,除空白对照组ig继续生理氯化钠溶液外,其余两组均ig2g·kg-1的淀粉。分别于ig淀粉后0,0.5,1,2h取小鼠眼眶静脉血,测定血清葡萄糖含量。

5.3g配方-1葡萄糖

方法同5.2,将ig淀粉改为ig2g·kg-1葡萄糖。分别于ig葡萄糖后0,0.5,1,2h取小鼠眼眶静脉血,测定血清葡萄糖含量。

6组织病理学检测

取正常小鼠20只随机分成正常组和正常给药组;另取糖尿病小鼠20只随机分成糖尿病组与糖尿病给药组。给药组连续ig45mg·kg-1的AI7d,禁食不禁水12h后处死小鼠,快速切取完整的结肠,去除系膜组织和十二指肠,用冷生理氯化钠溶液冲洗肠腔,除去内容物。将漂洗后的肠段用纱布吸去表面水分,等分成相同长度的前、中、后三部分,各部分肠段沿长轴剖开,用冷