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hplc测定牡丹皮及非药用部位木信皮酚的含量

牡丹皮是牡丹科的一种干燥的根皮。具有清热凉血,活血化化瘀的功效。该植物主要分布在中国安徽、四川、江苏等地。牡丹皮中有效成分主要为丹皮酚,为控制产品质量,保证疗效。本文建立了分离度良好,重现性较好,阴性液无干扰的丹皮酚高效液相分析方法,现将研究结果报道如下。

1仪器、试剂和仪器

Agilent1200高效液相色谱仪;UV-265紫外分光光度仪,甲醇(天津四友生物医学技术有限公司色谱纯),丹皮酚(中国药品生物制品检定所批号110708-200506含量测定用),其它试剂为分析纯。

2方法和结果

2.1试验溶液的配置

2.1.1标准物质的配置

精密称取丹皮酚对照品适量,加甲醇制成每1mL中含40μg的溶液,摇匀,即得。

2.1.2超声处理法

取牡丹皮及木心的粗粉约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50mL,称定重量,超声处理(功率250W,频率25kHz)30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液1mL,置10mL量瓶中加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。

2.2检测波长的选择

将对照品丹皮酚适量溶甲醇中,进行光谱扫描,在274nm波长处有最大吸收,故选定274nm为丹皮酚的检测波长。

2.3丹皮酚的理化性质

色谱柱:DiscoveryC184.6mm×200mm,流动相:甲醇-水(45∶55),检测波长:274nm,在此色谱条件下,丹皮酚可与其它成分基线分离,结果见图1、2、3。

2.4标准曲线的绘制

精密量取“2.1.1”中制备的对照品溶液2、5、10、15、20μL进样,在“2.3”色谱条件下测定峰面积。以峰面积为纵坐标,丹皮酚进样量为横坐标,绘制标准曲线,并计算得回归方程。回归方程:Y=90.183X+25.265(r=0.9995)。结果表明,丹皮酚在0.0793～0.793μg范围内呈良好的线性关系。

2.5色谱峰面积测定

精密吸取样品供试液,按上述色谱条件,分别在0,2,4,6,8h进行测定,每次10μL,测定色谱峰面积。测定结果提示:供试品溶液制备后8h内测定,RSD为1.13%,丹皮酚色谱峰的峰面积无明显变化,说明在此时间内,供试品溶液化学性质稳定。

2.6仪器精密度试验

精密吸取样品供试液,按上述色谱条件,连续进样6次,每次10μL,测定色谱峰面积,测定结果RSD为1.0%,表明仪器精密度良好。

2.7样品含量测定

取牡丹皮的粗粉约0.5g,精密称定,共6份,按“2.1.2样品供试液的制备”下方法提取,精密吸取供试品溶液,按上述色谱条件,每次10μL,测定峰面积,并计算含量。6次测定结果的RSD为2.36%,表明其重现性较好。

2.8对照品溶液的制备

取已知含量的牡丹皮的粗粉约0.1g(含量1.9%),精密称定,精密加入丹皮酚对照品溶液50mL(40μg·mL-1),置具塞锥形瓶中,按“2.1.2样品供试液的制备”下方法提取,共6份。进样10μL,计算回收率。测定结果见表1。

2.9不同地区的牡丹皮中丹皮酚的含量根据干燥产品计算

按样品含量测定方法操作,测定结果见表2。

2.10不同产地的非中药部分木心丹皮酚的含量根据干燥产品计算

按样品含量测定方法操作,测定结果见表3。

3高效液相色谱法

牡丹皮中主要成分为丹皮酚,测定其主要有效成分丹皮酚含量对于控制该药材的质量,更好地保证临床疗效,具有重要意义。

文献报道丹皮酚苷的含量测定方法有有紫外分光光度法、高效液相色谱法,本文建立的方法具有样品处理简单,操作方便,在理论塔板数按丹皮酚峰计算不低于4000时,样品分离良好。

在流通市场中的牡丹皮药材,常见有木心混入,而木心为牡丹皮传统非药用部位,是目前药品检验中对牡丹皮质量进行控制的重要指标,因此木心中的成分及含量的研究非常重要。本试验结果显示,牡丹皮木心在本试验条件下色谱峰图谱相似,丹皮酚含量接近。以丹皮酚是为牡丹皮的质控指标的有效性,及木心作为的非要用部位的科学性值得进一步的深入研究。