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hla-drb1、-dqa1和-dqb1的多态性与乙型肝炎的关系

感染肝炎病毒（hbv）后，人体表现出不同的临床病史。病毒本身的因素是此外，不同的个体对hbv的免疫反应不同，因此这种易感性的差异与个体的免疫特性有关。后者主要取决于人类组织的一般体积（mhs）。人类白细胞抗原(HLA)是MHC的基因产物,为目前已知的最复杂的人类基因复合体。HLA基因最显著的特征是具有明显的多态性,其多态性的差异决定个体免疫应答的不同。HLA复合体作为调节机体免疫应答的重要基因群,与抗HBV免疫反应有着密切的关系,某些特殊的HLA基因型可能影响着HBV感染的慢性化和免疫反应的强弱。我们利用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR/SSP)技术通过对乙型肝炎(乙肝)患者中HLA-DRB1、-DQA1和-DQB1基因多态性的分析,为从基因水平研究免疫遗传因素在慢性乙肝发病机制中的作用,以及探索疾病易感基因和/或抗性基因提供参考。

基因组dna的提取、鉴定和pcr检测

1.病例组:52例慢性乙肝患者系我科2000年住院患者,男43例,女9例,平均年龄(33±9)岁;30例急性乙肝患者系我科2000年门诊和住院患者,男24例,女6例,平均年龄(33±8)岁。符合2000年第十次全国传染病与寄生虫学术会议修订的诊断标准,均为重庆地区无血缘关系的汉族人。对照组为无血缘关系的该地区汉族健康人106名,男88名,女18名,平均年龄(31±8)岁。

2.方法:

(1)提取基因组DNA:采用ReadyPCRTM全血基因组DNA纯化系统快速提取被检者基因组DNA,试剂盒购自华美生物工程公司。

(2)PCR/SSP技术测定HLA-DRB1、-DQA1和-DQB1等位基因多态性:SSP只能与某一等位基因特异性片段的碱基序列互补性结合,从而通过PCR反应特异性地扩增该基因片段。HLA-Ⅱ类基因特异性由其第2外显子的核苷酸序列所决定的,PCR/SSP分型技术是扩增HLA-Ⅱ类基因第2外显子多态性区域基因片段。参照文献方法设计针对HLA-DRB1、HLA-DQA1和HLA-DQB1第2外显子区域多态性的SSP,分别鉴定HLA-DRB1*1～10、所有已知有表达的10种HLA-DQA1和13种HLA-DQA1等位基因型别。PCR扩增产物加样至含溴化乙锭的2%琼脂糖凝胶中,15V/cm凝胶电泳20min,经紫外透射下泳道中见明显DNA条带为阳性,确定其基因型别。每一PCR反应中,都含有一对扩增基因和一个内对照基因(人生长激素基因,其引物序列为:5’-primer:5’-GCCTTCCCAACCATTCCCTTA-3’;3’-primer:5’-TCACGGATTTC.TGTTGTGTTTC-3’)的引物,扩增产物大小为429bp。每次扩增后,人生长激素基因作为PCR扩增的阳性内对照,均应有阳性条带产物,如这一基因受抑,可能出现假阴性结果,同时还有利于纯合子基因型检测的准确性。

3.统计学分析:等位基因频率的计算采用直接计算法,两组间等位基因分布的差异用四格表法进行χ检验,对χ3.84者按Fisher法计算确切P值,并计算校正P值(Pc),Pc等于P乘以所比较的等位基因数。

病例对照hla-drb1等位基因检测

1.病例组与对照组的HLA-DRB1等位基因检测:重庆地区健康人群以HLA-DRB1*1201/1202、*1501/1502和*0901等位基因常见。慢性乙肝患者组的HLA-DRB1*0301等位基因频率明显高于正常对照组,两者相比差异有显著性(χ=12.3068,Pc=0.0074,表1)。急性乙肝患者组的HLA-DRB1*1101/1104等基因频率明显高于慢性乙肝患者组,两者相比差异有显著性(χ=11.9206,P=0.0145,表1)。HLA-DRB1等位基因电泳图谱见图1。

2.病例组与对照组的HLA-DQA1等位基因检测:重庆地区健康人群以HLA-DQA1*0301、*0102和*0501等位基因常见。慢性乙肝组的HLA-DQA1*0501等位基因频率明显高于对照组,两者相比差异有显著性(χ=9.2002,Pc=0.0157,表2)。急性乙肝组的HLA-DQA1*0301等基因频率明显高于慢性乙肝组,两者相比差异有显著性(χ=7.6781,Pc=0.0388,表2)。HLA-DQA1等位基因电泳图谱见图2。

3.病例组与对照组的HLA-DQB1等位基因检测:重庆地区健康人群以HLA-DQB1*0301、*0303和*0201等位基因常见。慢性乙肝组的HLA-DQB1*0301等位基因频率明显高于对照组,两者相比差异有显著性(χ=15.5938,Pc=0.0075,表3)。HLA-DQB1等位基因频率在急性乙肝和慢性乙肝组差异无显著性(