脂蛋白脂酶基因多态性分布及其与血脂、体质指数和膳食因素的关系.docxVIP

脂蛋白脂酶基因多态性分布及其与血脂、体质指数和膳食因素的关系

2002年，根据中国居民营养和健康状况的研究，中国成人血糖值的发病率为18.6%，预计中国的血糖值异常患者数量为1.6亿。其中:高胆固醇血症2.9%,高甘油三酯血症11.9%,低高密度脂蛋白血症7.4%,另有3.9%的人血胆固醇边缘升高。我国成人超重率为22.8%,肥胖率为7.1%。高脂血症不但是一种严重危害人类健康的疾病,而且还是冠心病和动脉粥样硬化等心血管病的主要危险因素。大量流行病学调查资料表明,血脂及载脂蛋白水平随年龄增长而升高,同时又受多基因-多因素影响。脂蛋白酯酶(1ipoproteinlipase,LPL)是人体脂质代谢的关键酶类,表达于体内的大多数组织,尤其是骨骼肌、心肌和动脉组织,还由巨噬细胞分泌。它的活性是影响血脂水平的重要因素。国内外研究发现LPL基因的非编码区存在的多种遗传位点变异可导致LPL活性的下降并影响体内的血脂水平。本研究探讨高脂血症人群的脂蛋白脂酶PvuⅡ基因多态性的分布及其与血脂谱的关系及不同基因型BMI与膳食能量来源组成的关系。

1对象和方法

1.1病例组和对照组的选择

选取上海市某社区无亲缘关系无肝肾及甲状腺疾病的汉族常住居民作为研究对象,其中156例高脂血症患者(总胆固醇≥5.72mmol/L或甘油三酯≥1.70mmol/L)作为病例组,同时选取154名血脂正常者(总胆固醇5.72mmol/L,且甘油三酯0.70mmol/L=作为对照组。男性年龄为57.9±8.9岁,女性为58.4±9.5岁。

1.2本研究

1.2.1血脂指标的测定

采集试验人群清晨空腹静脉血5ml,3000r/min离心15min,分离血清,用于血脂测定。

⑴总胆固醇(TC)测定:用酶法试剂盒(购自上海荣盛生物技术公司)测定。

⑵甘油三酯(TG)测定:用酶法试剂盒(购自上海荣盛生物技术公司)测定。

⑶高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定:用沉淀法试剂盒(购自上海荣盛生物技术公司)测定。

⑷LDL-C计算:LDL-C=TC-TG/2.2-HDL-C

⑸BMI计算:体重(kg)/身高(m)2

1.2.2pcr扩增产物的表达

⑴基因组DNA提取:用酚-氯仿抽提法。

⑵相应的PvuⅡ目的片断扩增:用聚合酶链反应(PCR)法。PCR扩增特异片段LPL基因PvuⅡ酶切位点多态性引物参照文献设计,引物序列为:P1:5-TGGCACCCATGTTGAAGGTG-3,P2:5-TTAACTTCT-GATAACAATCTC-3。PCR扩增反应体系50μl,组成如下:5μl10倍缓冲液,(氯化镁终浓度为2.5mmol/L),两个引物各50pmol,三磷酸脱氧核苷酸终浓度为200mol/L,TaqDNA聚合酶2U,模板DNA1μg,加去离子水至50μl。反应条件为:94℃4min(预变性),94℃30S(变性),60℃30S(退火)、72℃1min(延伸)、循环35次;最后72℃延伸5min。反应完成后,以1.5%的琼脂糖凝胶电泳在紫外灯下鉴定扩增结果,在440bp处出现的荧光条带为特异的PCR产物。

⑶限制性内切酶分析:将PCR扩增产物15μl用10UPvuⅡ内切酶37℃酶解4h,以1.5%的琼脂糖凝胶电泳分离酶切片段。

1.2.3油食用量的测定

采用连续3d24h膳食回顾法调查各种食物的摄入总量。油食用量按家庭消耗量及食用人数推算。调查表格经调查员仔细核对后,编码校对,录入SY营养分析食谱制定计算分析试验对象每日热能、各种营养素和各类食物的摄入量。

1.3统计学方法

使用SPSS13.0统计软件包进行数据分析。等位基因的频率采用直接计数法,计数资料的比较采用卡方检验,两组计量资料的比较采用t检验,三组以上计量资料采用方差分析。多个影响因素的分析用多元回归分析及偏相关分析。

2结果

2.1研究对象的基因型及构成比

PvuⅡ基因扩增的目的片断为440bp,根据LPL基因是否存在PvuⅡ酶切位点可将其等位基因称为P+等位基因和P-等位基因,从而构成三种基因型,即P+P+、P+P-和P-P-纯合子。P+P+含330bp、110bp,P+P-含440bp、330bp、110bp,P-P-含440bp。本研究人群LPL基因PvuⅡ位点三种基因型均检出,如图1所示。

本研究310名研究对象P+P+、P+P-及P-P-三种基因型的构成比分别为42.0%,43.5%和14.5%,符合Hardy-Weinberg定律(P0.05),说明本研究人群LPL基因变异已达到遗传平衡,有群体代表性。据此计算出P-等位基因的频率为36.3%,P+等位基因的频率为63.7%(表1)。高脂血症组与血脂正常组不同基因型及P-和P+构成比差异