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nogo-a在大鼠脑缺血后长期表达的研究

少突胶质细胞（olg）是中枢神经系统（cns）髓鞘的主要成分，其变化与免疫反应之间存在一定关系。脑缺血损伤后CNS血脑屏障通透性发生改变,允许血液中的免疫成分进入脑内,同时OLIG被转化成抗原提呈细胞(APC)和免疫效应细胞,释放各种免疫抑制因子、激活APC提呈抗原,发挥抗原清除作用,抑制脑组织再生及修复。Nogo-A是CNS髓鞘中主要的轴索抑制因子,表现出强烈的抑制轴突生长作用,其主要由OLIG表达,离体和活体实验均已证实它与动物CNS神经轴索的再生关系密切。本实验采用改良的ZeaLonga法制备持续性闭塞大鼠大脑中动脉的脑缺血模型,应用免疫组织化学法观察远隔部位小脑皮层Nogo-A蛋白在不同时期的动态表达。

1材料和方法

1.1动物、试剂与仪器

实验动物:SPF级SD(Sprague-Dawley)成年雄性健康大鼠,体质量250~280g,购自中国医科大学附属盛京医院实验动物中心,合格证号:辽实动质字019。试剂与药品:10%水合氯醛(青岛宇龙海藻有限公司);兔抗Nogo-A多克隆抗体(购自santacruz公司(批号:SC-25660);SABC免疫组化试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司);DAB显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)。

1.3统计处理

采用SPSS17.0统计软件处理。数据以表示,两组间采用配对t检验方法进行比较,以P0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1he染色观察细胞形态

2.2假手术组不同时间点nogo-a蛋白表达水平比较

Nogo-A蛋白阳性免疫反应产物主要分布于OLIG的胞浆,染色呈棕黄色细颗粒沉积,见图1b~图1f)。假手术组各时间点Nogo-A蛋白表达无明显差异;MCAO组于术后第5、7、10天较假手术组明显增高(P0.05),第1、3天无统计学差异(P0.05),见表1。

3神经纤维联系对球磨前nogo-a在血清学检测中的作用

脑缺血损伤后,脑组织产生抗原性物质,激发CNS的免疫反应,少突胶质细胞突起增生、变形或分泌某些细胞因子,使静息的少突胶质细胞被激活成为抗原提呈细胞(APC),同时表达MHC-I,APC将与MHC-I结合的抗原提呈给T淋巴细胞,增强的T细胞反应加剧CNS免疫损伤,过多增生的少突胶质细胞又可以分泌轴突再生抑制性因子-Nogo-A,从而形成不利于神经元修复和轴突生长的微环境。脑损伤时,OLIG被激活形成具有APC特征的细胞,表达Nogo-A蛋白,对损伤产生免疫反应。免疫系统与CNS之间的相互作用广泛参与了CNS的免疫监视及CNS的多种病理过程。CNS损伤后神经轴突生长明显受限制。Caroni等用聚丙烯酰胺凝胶电泳首次从大鼠和小鸡CNS的髓鞘磷脂中分离纯化出相对分子质量为Mr250000的Nogo蛋白。其中Nogo-A最长,是唯一由少突胶质细胞表达的整合膜蛋白,全长存在两个抑制性功能域。CNS神经元损伤后,溶解的少突胶质细胞释放Nogo-A氨基端和Nogo-66的可溶性蛋白水解片段,抑制轴突生长。

本实验通过免疫组织化学染色结果显示:模型组Nogo-A蛋白表达较假手术组增高,以第5d、7d和10d有统计学意义,这说明大脑中动脉闭塞后不仅引起局部脑组织的缺血改变,还会通过神经纤维联系引起远隔部位小脑发生继发性免疫损害,即神经机能联系不能,其中轴突生长抑制因子Nogo-A在继发性免疫损害过程中发挥了较强作用。Nogo-A抑制轴突再生的免疫学机制错综复杂,本文所述只是其中一部分,目前大量研究已致力于通过影响Nogo-A的免疫学机制来促进受损神经元再生,为CNS损伤领域的研究热点和关注点,取得诸多硕果,被誉为是探索中枢神经损伤修复漫长道路中的一个里程碑。

1.2模型制备方法

实验动物制备及分组:60只大鼠,随机分为实验组(n=30,制作大脑中动脉闭塞模型)和假手术对照组(n=30),每组又按大脑中动脉闭塞时间点不同又分为1、3、5、7、10d五个亚组,每个亚组6只大鼠。动物模型制作:参照ZeaLonga尼龙线栓制备大脑局灶性脑缺血模型:实验用尼龙线直径为0.2mm,每段长5cm,在解剖显微镜下将尼龙线顶端烧烫成直径为0.25~0.30mm的光滑圆球,酒精清洁后置1∶2500U肝素生理盐水中备用;模型制备方法:用10%水合氯醛(0.4ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠后,将大鼠仰卧位固定在实验台上,取颈正中切口,切开皮肤,钝性分离各层组织,分离右侧颈总动脉(commoncarotidartery,CCA)、颈外动脉(externalcarotidartery,ECA)、颈内动脉(internalcarotidartery,ICA),结扎ECA及其分支,于ECA近分叉处作一小切口