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微生物验证专题知识培训微生物验证专题知识培训第1页

2菌种、培养基、试验室环境管理无菌检验及方法验证微生物程度检验及方法验证年版药典增修订情况

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3菌（毒种）管理方法1.菌种保管应有专员负责，保留于冰箱中，房门专员加锁，确保菌种安全（烈性菌种双人双锁）。保管人员变动时，必须严格交接手续。2.试验用菌种均从CMCC购置。菌种申购，由保管人依据菌种保留情况，提出申购，经上级责任人签字同意。申购单应注明菌种名称、菌号、数量及请购人。从指定单位购到菌种后，应逐一查对菌种名称、菌号、数量，无误后方可接种，应做好统计。3.菌种应有严格登记，包含形态，分离日期，判定日期，签发者，主要判定性能，并注明使用、转移、销毁情况及原因。4.菌种转种等均应在超净工作台进行，以防污染。5.各种菌种应按要求时间接种，普通在接种三次后作一次全方面判定，注意菌种有没有污染及变异，如发觉变异时，应及时更换。微生物验证专题知识培训第3页

4全部存在菌种应具备清单。保留菌、毒种传代或冻干均应填写专用统计，菌种管上应有牢靠标签，标明菌种编号、代次、批号、日期培养、在药品微生物检验时，可进行简单染色镜检，以确保在试验中所用菌种正确。致病菌与普通菌种要分开管理。保留菌种传代、移种后，销毁原菌种之前，应仔细检验新旧菌种标签是否正确。微生物验证专题知识培训第4页

5菌种分类三类：仅具普通性危险，能引发试验室感染机会较少，普通微生物学试验室采取普通试验技术能控制感染或有对其有效免疫预防方法菌种。四类：生物制品、菌苗、疫苗生产用各种减毒、弱毒菌种及不属于上述一、二、三类各种低致病性微生物菌种。微生物验证专题知识培训第5页

6微生物与生物安全试验室适用等级二级生物安全试验室（BSL-2）：登革热病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、流感病毒等。脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎链球菌、军团菌、白喉棒杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠埃希氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、空肠弯曲菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、非经典结核分枝杆菌等。钩端螺旋体、致病性支原体、鹦鹉热衣原体、放线菌、青霉菌等。微生物验证专题知识培训第6页

7验证试验常见菌种枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]生孢梭菌[CMCC（B）64941]铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]大肠埃希菌[CMCC（B）44102]乙型副伤寒沙门菌[CMCC（B）50094]白色念珠菌[CMCC（F）98001]黑曲霉[CMCC（F）9003]微生物验证专题知识培训第7页

8细菌室消毒隔离办法1.天天工作前用消毒液消毒工作台，上班前、下班后开紫外灯（最少半小时）进行空气消毒。2.非必要品禁止带入试验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。3.使用后载玻片、盖片、平皿、试管等用消毒液浸泡，经煮沸后清洗或丢弃。4.试验后血液标本用消毒液浸泡后煮沸消毒，全部用于试验反应板、吸头等用消毒液浸泡（最少24小时以上）后清洗或丢弃。5.全部微生物培养物（细菌、支原体、真菌等培养物），不论标本阳性或阴性均用消毒液浸泡后，经煮沸消毒，才能清洗或丢弃。微生物验证专题知识培训第8页

9染菌物出试验时及试验后将染菌/带菌物品放于盛有0.1％苯扎溴铵溶液灭菌专用桶中浸泡。灭菌专用桶加盖，送集中洗涤室热压灭菌。将灭菌桶在121℃30min条件下进行高压湿热灭菌，灭菌后再取出清洗。高压蒸汽灭菌效果验证微生物验证专题知识培训第9页

10菌种保藏步骤①干燥菌种复苏，划平板②挑选特征经典纯菌菌落；（制菌悬液使用）③确定保藏适当菌体形态；④选择最适宜保藏方法，定时对保藏菌种进行检验，观察是否发生改变，若有改变，须改变保藏方法。保藏期满应及时进行移种。微生物验证专题知识培训第10页

11琼脂斜面低温保留法（厂家常见）方法：将经典菌落接种在斜面（特殊菌种可用液体培养基）上，按要求培养，待充分生长后，把培养好新鲜菌种用牛皮纸保好，可将菌种保藏管棉花塞换成橡胶塞。放在4℃左右冰箱中保藏。每隔2~3个月移种一次。若用半固体高层培养基穿刺培养，普通可保藏六个月~一年。适用范围：细菌、酵母菌、霉菌保藏。优点:简便，对大多数微生物都适用。缺点:保藏期太短；传代次数多，易发生变异及污染。微生物验证专题知识培训第11页

12冷冻真空干燥保藏法主要是将待保藏菌种混于有保护作用介质内制成菌液，分装在安瓿中于冷冻条件下使其快速冻结，因冻结可使晶形细致，不致损伤活菌细胞。然后用真空抽气减压，是安瓿内冰晶液体升华，水气快速