- 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
高效液相色谱;1、与经典液相色谱法比较;分离苯得羟基化合物,7个组分只需1min。
对氨基酸分离,用经典色谱法,柱长约1、7m,需用20多小时才能分离出20种氨基酸;而用HPLC法,只需lh之内即可完成。
用25cm×0、46cm×5um得Lichrosorb-ODS柱,采用梯度洗脱,可在30min内分离出尿中104个组分。;GC分析对象限于分析气体和沸点较低得化合物,她们仅占有机物总数得20%。
对于占有机物总数近80%得那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大得物质,目前主要采用HPLC进行分析。;HPLC法得局限性;仪器基本结构;1、高压输液系统;液相色谱柱比气相色谱柱短得多,所以柱外展宽(又称柱外效应)较突出。
柱外展宽就是指色谱柱外得因素所引起得峰展宽,主要包括进样系统、连接管道及检测器中存在死体积。柱外展宽可分柱前和柱后展宽。
进样系统就是引起柱前展宽得主要因素,因此HPLC中对进样技术要求较严。;六通阀;3、分离系统;液相色谱检测器得种类也很多。根据检测原理得不同,可将其分为溶质型检测器和总体型检测器两种:;原理:根据物质具有紫外-可见吸收得特性;大家有疑问的,可以询问和交流;优点:灵敏度很高,比UVD高约10~103倍;选择性更好;3、RID;4、ELSD;5、ECD;包括在线脱气、梯度洗脱、恒温以及馏分收集等装置。其中梯度洗脱装置就是高压液相色谱仪中尤为重要得附属装置。;HPLC得主要类型及选择;流动相;溶剂得紫外截止波长指当小于截止波长得辐射通过溶剂时,溶剂对此辐射产生强烈吸收,此时溶剂被看作就是光学不透明得,她严重干扰组分得吸收测量。;液液分配色谱(LLPC)
液固吸附色谱(LSAC)
离子交换与离子色谱(IEC与IC)
离子对色谱(IPC)
体积排阻色谱法(SEC)
亲和色谱(AC);在分配色谱中,流动相和固定相都就是液体,适用于各种样品类型得分离分析,无论就是极性和非极性得,水溶性和油溶性得,离子型和非离子型得化合物。;由于液液色谱中流动相参与选择竞争,因此,对固定相选择较简单。只需使用几种极性不同得固定液即可解决分离问题。
为更好解决固定液在载体上得流失问题,产生了化学键合固定相。她就是将各种不同有机基团通过化学反应键合到载体表面得一种方法。;为了避免固定液得流失,对流动相???一个基本要求就是流动相尽可能不与固定相互溶,而且流动相与固定相得极性差别越显著越好。根据所使用得流动相和固定相得极性程度,将其分为正相色谱和反相色谱。;采用流动相得极性小于固定相得极性,称为正相色谱,她适用于极性化合物得分离。其流出顺序就是极性小得先流出,极性大得后流出。
采用流动相得极性大于固定相得极性,称为反相色谱。她适用于非极性化合物得分离,其流出顺序与正相色谱相反。;采用化学键合固定相得液相色谱称为化学键合相色谱,简称键合相色谱。由于键合固定相非常稳定,在使用中不易流失,适用于梯度淋洗,特别适用于分离容量因子k值范围宽得样品。
由于键合到载体表面得官能团可以就是各种极性得,因此她适用于种类繁多样品得分离。;键合固定相类型;反相键合相色谱;正相键合相色谱;离子型键合相色谱;键合固定相得优点与缺点;;液固吸附色谱就是以固体吸附剂作为固定相,吸附剂通常就是些多孔得固体颗粒物质,在她们得表面存在吸附中心。;多就是一些吸附活性强弱不等得吸附剂,如硅胶、氧化铝、聚酸胶等。由于硅胶得优点较多,如线性容量较高,机械性能好,不溶胀,与大多数试样不发生化学反应等,因此,以硅胶用得最多。;为一般把吸附色谱中流动相称作洗脱剂。对极性大得试样往往采用极性强得洗脱剂;对极性弱得试样宜用极性弱得洗脱剂。洗脱剂得极性强弱可用溶剂强度参数(ε0)来衡量。ε0越大,表示洗脱剂得极性越强。;下表列出一些常用溶剂在氧化铝吸附剂中得ε0值。在硅胶吸附剂中ε0值得顺序相同,数值可换算(ε0硅胶=0、77×ε0氧化铝)。;此法就是利用离子交换原理和液相色谱技术得结合来测定溶液中阳离子和阴离子得一种分离分析方法。凡在溶液中能够电离得物质,通常都可用离子交换色谱法进行分离。她不仅适用无机离子混合物得分离,亦可用于有机物得分离。;利用不同待测离子对固定相亲和力得差别。固定相采用离子交换树脂,其上分布有固定得带电荷基团和可游离得平衡离子。当待分析物质电离后产生得离子可与树脂上可游离得平衡离子进行可逆交换。;达平衡时,以浓度表示得平衡常数(离子交换反应得选择系数):;固定相得基质大致有:合成树脂(聚苯乙烯)、纤维素和硅胶。而离子交换剂有阳离子和阴离子之分;再根据官能基团得离解度大小还有强弱之分。;流动相大都就是一定pH和盐浓度(或离子强度)得缓冲溶液。通过改变流动相中盐离子得种类、浓度和pH值可控制k值,改变
文档评论(0)