CDR1as的表观沉默通过IGF2BP3介导引起恶黑的侵袭和转移.pptx

CDR1as的表观沉默通过IGF2BP3介导引起恶黑的侵袭和转移汇报人：汇报时间：

恶黑中CircRNA的概述及研究目标CDR1as的确定CDR1as的功能研究：体外体内实验CDR1as的上游机制研究CDR1as的下游机制研究CDR1as与临床耐药性的关系

一、恶黑中CircRNA的概述及研究目标CDR1as的确定3CircRNA的总体描述CircRNA在14里样本中整体数量和发生率CircRNA在恶黑和正常组织表达的差异分析CDR1as的异常现象Circulizaitonratia降低随着疾病进展表达下降低表达与不良预后相关CircRNA与其起源线性RNA的相关性分析CDR1as具有临床意义

4Fig1A-FA：14例样本中CircRNA的总体数量及发生率B-C：恶黑组织与正常组织的CircRNA表达水平显著不同。D：大多数CircRNA与相应的linearRNA显著相关E：CDR1as/linearRNA比值低于报道不一样。F：10个恶黑样本中，6个未检测到，2个表达水平低于正常黑素细胞。

5Fig1J:53例原发和52例转移恶黑中PCR检测CDR1as的表达(Bresholdthickness，原发，淋巴，转移)。K-P量化比较。Q-R生存分析

二、CDR1as的功能研究：体外和体内6体外细胞对缺乏CDR1as的细胞系无影响下调表达CDR1as抑制侵袭能力不影响增殖，影响侵袭上调表达CDR1as体内细胞下调表达CDR1as不影响增殖促进转移

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三、CDR1as的上游机制研究8既往研究提示LINC00632/CDR1as基因区域H3K27me3富集Chip-PCR验证LINC005532亚型表达上调EZH2抑制剂抑制H3K27me3表达验证

9Fig2A：LINC00632/CDR1as基因区域存H3K27me3富集B-C：ChIP-PCR验证在LNC00632的两个位点富集。D-E:对两种细胞系使用EZH2抑制剂，3中LINC00632亚型和CDR1as的表达均逐渐上调。

四、CDR1as的下游机制研究（1）10文献提示CDR1as与miR-7相关不影响miR-7表达下调表达CDR1as不能逆转CDR1asdepletion对侵袭的影响。上调表达miR-7不影响miR-7GFP荧光信号不影响miR-7的靶基因表达下调表达CDR1as不影响miR-7depletion后靶基因的变化

11图4A:下调表达CDR1as不影响miR-7表达B：下调表达CDR1as不影响miR-7的荧光信号C-D：下调表达CDR1as不影响miR-7靶基因的表达D:下调miR-7表达不能逆转CDR1asdepletion对侵袭的影响。F:下调CDR1as对下调miR-7后miR-7的靶蛋白无明显影响

四、CDR1as的下游机制研究（2）12四、CDR1as的下游机制研究（1）12文献提示CDR1as与IGF2BP3相关免疫共沉淀分析下游靶基因对比下调下游基因验证分子间相互关系基因序列对比

13图5A-BRNA免疫共沉淀PCR验证CDR1as与IGF2BP3相关。C:沉默IGF2BP3可废除CDR1as下调导致的侵袭。D-E：IGF2BP3RIPs中CDR1as丰度最高。F：IGF2BP3的bindingmotif在CDR1as序列富集。G:删除CDR1as后，变化的基因与IGF2BP3靶基因明显重合。F：下调9个靶基因，显著逆转CDR1as下调后增加的侵袭性。I:westblot提示CDR1as下调后SNAI2的上调是依赖IGF2BP3的

五、CDR1as与临床耐药性的关系14MAPK及GPX4抑制剂与CDR1as明显相关网上数据库查询CDR1as与药敏关系进一步发现MITF-Lo/AXL-H与GPX4拮抗剂药敏相关在5种细胞系中验证不同药敏细胞系MITF-Lo/AXL-H的表达差异对5种细胞系进行药敏实验

15图6A:CDR1asLow的恶黑对MAPK抑制剂更敏感。B：CDR1asHigh的对GPX4抑制剂更敏感。C:CDR1as高低表达组间GPXsgRNA是变化最大的，提示CDR1as的表达与GPX4抑制剂的治疗反应有关。D：高表达的CDR1as与MITF-Lo/AXL-H有关。E-F：在5个细胞系中证实CDR1as与MITF-Lo/AXL-H的关系。G-H：5个细胞系对GPX4抑制剂RSL3敏感性明显不同。

结论16一、在恶黑中中circRNA的表达与正常组织显著不同。二、CDR1as的下调能促进癌症的侵袭和转移。三、CDR1as的功能由IGF2BP3介导，且与miR-7无关。四、CDR1as的表达水平与GPX4抑制剂药敏相关。

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