稀土氯化镧增强卵巢癌顺铂耐药细胞敏感性的蛋白表达分析及分子机制研究.pdf

摘要

摘要

目的：

探讨稀土氯化镧对卵巢癌细胞（人COC1细胞系、人卵巢癌SKOV3细胞系）

及卵巢癌顺铂耐药细胞（COC1/DDP细胞系、SKOV3/DDP细胞系）的作用以及

蛋白表达的机制。

方法：

1、选择人卵巢癌（COC1）细胞株、人卵巢癌耐顺铂细胞株（COC1/DDP）、

人卵巢癌（SKOV3）细胞株作为实验细胞株，并通过将SKOV3培养于含有DDP

的培养液中并逐步增加DDP的浓度使其产生耐药性，获得SKOV3/DDP耐药细

胞株。

2、采用0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0mol/L浓度

的氯化镧分别进行COC1细胞系及COC1/DDP细胞系的常规培养及添加半数已

知浓度顺铂的联合培养，于48h后，利用MTT法进行各组细胞增殖抑制率的检

测。

3、按照加入氯化镧浓度不同将COC1和COC1/DDP细胞分别分为对照组（细

胞悬液+培养基）、低剂量组（0.5µmol/L氯化镧）、中剂量组（2µmol/L氯化

镧）和高剂量组（5µmol/L氯化镧），加入氯化镧培养48h后，在透射电子显微

镜下观察不同浓度氯化镧处理后COC1和COC1/DDP细胞形态变化。

4、依据细胞处理方法，将COC1和COC1/DDP细胞分别分为对照组（COC1

或COC1/DDP）、顺铂组（COC1或COC1/DDP+DDP）、氯化镧组（COC1或

COC1/DDP+氯化镧）和顺铂+氯化镧组（COC1或COC1/DDP+DDP+氯化镧），

利用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率，以Westernblot检测不同处理方式下

COC1/DDP细胞中ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白的相对表达量。

5、采用DDP浓度逐渐增加的方法诱导卵巢癌DDP耐药细胞株

（SKOV3/DDP），并在显微镜下观察其形态变化。

6、向SKOV3和SKOV3/DDP细胞加入浓度分别为1、2、4、6、8、10、20、

30µg/mL的DDP，培养24小时后，采用CCK8分析DDP对SKOV3和SKOV3/DDP

细胞的生长抑制率（Cellgrowthinhibitionrate，GIR）和耐药指数(RI)。

II

摘要

7、向SKOV3/DDP细胞中分别加入浓度为5、10、20、40、60、80、160、

320μg/mL的氯化镧，培养36、48小时后采用CCK方法分析不同浓度不同时间

药物对细胞生长抑制率。

8、依据细胞处理方式不同将SKOV3和SKOV3/DDP细胞分为对照组

（SKOV3或SKOV3/DDP）、氯化镧组（SKOV3或SKOV3/DDP+10μg/mL氯

化镧）、DDP组（SKOV3或SKOV3/DDP+5μg/mLDDP）和氯化镧+DDP组

（SKOV3或SKOV3/DDP+5μg/mLDDP+10μg/mL氯化镧）。将细胞处理后置

于培养箱中培养7d计算不同实验组细胞克隆数。利用流式细胞术检测各组

SKOV3和SKOV3/DDP细胞的凋亡率，以Westernblot检测不同处理方式下

SKOV3/DDP细胞中ERCC1、Ki67、CDK6、c-Cbl和Caspase-3蛋白的相对表

达量。

结果:

1、顺铂处理后COC1及COC1/DDP细胞的增殖率明显降低，且呈现出浓度

依赖性。COC1细胞株的IC50为2.11g/mL，COC1/DDP细胞株的IC50为

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