脂蛋白亚组分在激素性股骨头坏死中的作用及中药干预机制研究.pdf

摘要

摘要

背景：

激素性股骨头坏死（glucocorticoid-inducedosteonecrosisofthefemoralhead，

GIONFH）是骨科中较为常见的疾病，多伴有长时间或者大剂量糖皮质激素使用

史。激素作为一种抗炎及免疫抑制剂，临床使用较为广泛，在危急情况下往往

用于抢救生命。从“非典”到“新冠肺炎”，激素都在其中扮演着救命的重要角色，

但激素是一把“双刃剑”，在治疗疾病的同时也伴随着较多副作用的产生，给患者

带来了巨大的痛苦。经过国内外研究人员的不懈努力，与GIONFH相关的研究

报道层出不穷，但目前应用于临床且取得良好效果的方法却是凤毛麟角。因此，

如何早期诊断及防治GIONFH仍是急待解决的问题，这也是中医“治未病”的理

念，具有悠久的历史，以往中医药作为经验性治疗手段，在疾病的防治上发挥

着重要作用，如何通过现代化研究手段来探索并阐述中药在治疗GIONFH的具

体机制具有重要的意义。

中药制剂骨蚀灵胶囊（gushilingcapsule,GSLC）由十九味中药组合而成，

已在临床应用20余年，在治疗GIONFH方面有确切疗效。而且前期研究表明骨

蚀灵胶囊通过调节胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白的代谢紊

乱来预防GIONFH的发生，但是由于GIONFH发病的复杂性及复方中药具有“多

组分、多靶点”的特性，单纯从常规血脂代谢指标的角度具有较多局限性。中药

防治GIONFH的作用机制还需做进一步研究。

脂蛋白亚组分检测在心脑血管疾病、糖尿病等代谢性疾病的病情监测、风

险评估应用较为广泛而成熟，目前较多采用的垂直自动脂蛋白亚类分型（Vertical

AutoProfile，VAP）法具有高灵敏度，高分辨率，经济和临床普遍适用性的特点，

是对脂代谢紊乱深入研究的补充。

骨细胞凋亡是GIONFH发病机制的重要组成部分，其中关于Wnt/β-Catenin

信号通道的研究较为深入，信号因子Dickkopf相关蛋白1（DKK1）为该通道的

较强抑制剂，通过调控DKK1即可控制Wnt/β-Catenin信号通道的“开关”，从而

影响骨细胞的增殖与凋亡途径。

然而，采用脂蛋白亚组分在GIONFH中的作用和Wnt/β-Catenin信号通路对

骨细胞凋亡的影响这两种方法来研究骨蚀灵胶囊防治GIONFH的作用机制尚未

II

摘要

见报道。

目的：

1.本研究旨在通过构建的GIONFH动物模型，运用VAP脂蛋白亚组分检测

及脂代谢相关基因的表达检测方法来探索发现GIONFH过程中的“预测因子”，

可用于早期诊断GIONFH，同时探索中药骨蚀灵胶囊在动物体内防治GIONFH

的具体作用机制。

2.体外实验对不同条件下培育的人永生化成骨细胞增殖及凋亡情况进行检

测，寻找调控凋亡关键节点。从细胞信号通路角度探讨中药骨蚀灵胶囊治疗

GIONFH的具体机制。

方法：

本研究通过构建兔GIONFH模型进行体内实验及人永生化成骨细胞进行体

外实验研究中药骨蚀灵胶囊在GIONFH中的作用机制。动物体内实验部分运用

脂蛋白亚组分VAP检测分析平台，跟踪中药干预后脂蛋白亚组分的变化差异与

组织病理学、影像学检测结果的关联分析，寻找GIONFH的“预测因子”；脂代

谢相关基因mRNA表达结果与“预测因子”的关联分析，从更深层面探讨脂质代

谢紊乱导致GIONFH及中药骨蚀灵胶囊干预的机制。

体外实验则是通过使用激素、含骨蚀灵大鼠血清及降脂药洛伐他汀和人重

组DKK1蛋白在内几种不同培养基环境下培养人永生化成骨细胞，然后采用

CCK8检测骨细胞增值、流式细胞检测各组凋亡情况，通过检测不同分组的DKK1、

Runx2表达联合Wnt3a、β-Catenin信号通道蛋白表达进行对比，探索中药骨蚀

灵胶囊在防治GIONFH过程中所发挥的具体作用机制。

结果：

（1）通过采集不同干预后第2、4、8周三个时间点的实验