酶的分离纯化与制剂.pptVIP

第三章

酶的分离纯化与制剂;;;;;第一节酶分离纯化工作的基本原则;也就是说整个工作包括三个基本环节：;1．防止酶变性失效(denaturation-deactivation);1．防止酶变性失效(续);酶不可逆失活的原因和机理;;蛋白质的稳定化;稳定蛋白质（酶）的方法;2．选择有效的纯化方法;3．酶活性测定贯穿纯化过程的始终;第二节酶的抽提;一、预处理和破细胞;微生物胞外酶

可以用盐析或有机溶剂沉淀等从发酵液中沉淀成酶泥

胞内酶

要先收集菌体，经细胞破碎后提取;动物材料

应先剔除结缔组织和脂肪组织等

植物材料

应去皮等以免单宁等物质着色污染;酶，根据它的分布可分为细胞内酶(intracellularenzyme)和细胞外酶(excellularenzyme)。;破细胞(celldisruption);1、物理破碎：

—研磨（手磨，球磨和石磨），

—机械捣碎（匀浆器和高速组织捣碎器等），

—高压法，

—爆破性减压法，

—专用波振荡，

—快速冷冻融化法等。;2、化学破碎：

—渗透作用

—自溶：

—酶处理

—表面活性剂;（I）渗透作用

将指数生长期的菌体用缓冲液洗净，并悬浮于含蔗糖和EDTA的稀Tris缓冲液中，离心，加入