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其他分离技术

第一节

酶解反应分离技术

酶是一种由活细胞产生的生物催化剂，在生物体的新陈代谢中起着非常重要的作用。它参与生物体大部分的化学反应，使新陈代谢有控制地、有秩序地进行下去，从而使生命得以延续。

【酶的发现】

酶从发现到成熟地服务于民众，经历了漫长而又坎坷的历程。酶来源于人们对发酵机理的逐渐认识，早在几千年前，我们的祖先就开始利用生物酶来制造食品和治疗疾病。我国在4000多年前的夏禹时代已经掌握了酿酒技术，是世界上最早进行酿酒的国家之一；3000多年前的周朝已经掌握了制酱技术；2500多年前应用“曲”来治疗疾病，“神曲”就是一味沿用至今，具有消食和胃功效的中药。18世纪清朝康熙年间，提出了“酶者，酒母也”。

一、概述

（一）酶的分类

酶分成六大类，它们是氧化还原酶类、转移酶类、水解酶类、裂解酶类、异构酶类、合成酶类。

（二）酶的化学本质及特性

1.酶的化学本质?酶的化学本质是蛋白质，酶蛋白与许多蛋白不同之处在于酶都具有活性中心。活性中心以外的酶蛋白的其余部分不仅具有维持结构的作用，而且具有确定微环境的作用。酶分子的亲水性强弱、分子的带电性和电荷的分布，以及活性中心周围的环境都是由整个酶蛋白结构决定的，对于酶的催化特性具有很大的影响。

2.酶的特性

（1）蛋白质的一般特性

①酶是两性电解质，酶在电场中能像其他蛋白质一样泳动，酶的活性pH曲线和两性离子的解离曲线相似。

②紫外线、热、表面活性剂、重金属盐以及酸碱变性剂等能使蛋白质变性的因素，往往也能使酶失效。

③酶本身可被水解蛋白质的蛋白质水解酶分解而丧失活力。

（2）酶催化反应的高效性酶催化反应与一般催化反应不一样，它可以在常温常压和温和的酸碱度下高效地进行。

（3）酶反应的专一性一种酶只能催化一种或一类物质反应，即酶是一种仅能促进特定化合物、特定化学键、特定化学变化的催化剂。如淀粉酶只能催化淀粉水解，蛋白酶只能催化蛋白质水解。

【科海拾贝】

影响酶促反应的因素?酶在催化反应中不能改变反应的平衡，但可以加快反应速度。影响酶促反应的主要因素有底物浓度、酶浓度、激活剂、抑制剂、温度、pH值、作用时间以及实际生产中的工艺设备情况。

二、酶工程技术在中药分离中的应用

随着中药现代化的发展，酶工程技术应用于中药有效成分的提取、分离和纯化的研究开发也取得很大进展。

（一）酶技术在中药分离领域的应用原理

1.破坏植物细胞壁，加速目标成分的释放溶出?植物细胞壁是中药有效成分溶出的主要屏障。植物细胞壁主要成分是纤维素，纤维素酶可破坏植物细胞壁，如茶多糖是茶叶中的重要生物活性成分之一，传统提取方法通常采用水或有机溶剂浸出，但多糖难以从胞内释放，得率低而成本高。将复合酶（viscozymeL，含纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶等）和果胶酶用于茶多糖的提取，茶多糖的提取率可达3.29%，是水提法的2.7倍。其作用原理为复合酶和果胶酶可使茶叶细胞壁破裂，促进多糖溶出。

2.降解水溶性植物组织高分子物质，提高过滤分离效率?植物细胞初生壁中除了纤维素外还有半纤维素和果胶质，这些组分的存在使提取液的黏稠性增加，提取率较低，并且给提取液的过滤分离带来困难。在山楂黄酮类化合物的提取中，加入纤维素酶的同时加入果胶酶，总黄酮的提取率提高了16.9%。

3.对中药化学成分进行生物转化?利用酶作为生物催化剂，可对中药化学成分进行生物转化，修饰其结构或活性位点，从而获得新活性化合物。

（二）酶技术在中药分离领域应用的工艺过程

酶技术在中药领域应用的基本工艺过程，可以归纳为以下几个步骤：

1.酶的筛选、制备与活力测定?如采用漆酶提取黄芪中黄芪皂苷时先须制备漆酶粗酶液：取保藏的杂色云芝斜面进行活化培养，挑取适量菌丝转接于培养基平板上，再按一定的接种量接入三角瓶中，25℃振荡培养，定期检测酶活力；培养后发酵液经滤过、离心，取上清液，测定酶活力后低温保存，使用前再测酶活力。

2.酶解浸提及其工艺条件优选?酶解条件与pH值、温度和加酶量等因素有关，仍以上述研究为例，首先考察漆酶的加入量对提取率的影响，再采用正交表进行优选工艺参数，结果表明：影响黄芪皂苷提取率的主要因素是反应温度，其次是pH和反应总体积，影响最小的是时间。

3.酶的灭活及其与目标产物的分离?应根据目标产物的物理化学性质，在不影响目标产物活性的前提下，选择适宜的酶灭活及分离方法。

（三）酶技术在中药分离领域的作用

1.提高中药提取物中有效成分得率?将金银花以乙醇回流提取前，用纤维素酶和果胶酶分别或联合处理，实验结果表明，采用纤维素酶处理能显著提高金银花提取物中绿原酸得率（8.15g/100g），最适温度40～50℃，且酶用量和处理时间对绿原酸得率有显著影响；联合处理对绿原酸得率影响不明显，但能显著提高提取物得率。

2.用于提取液的精制，提高提取液的澄清度?中