《褐藻酸寡糖含量的测定》（征求意见稿）.docx

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褐藻酸寡糖含量的测定

1范围

本文件规定了褐藻酸寡糖含量的测定方法。

本文件适用于以褐藻酸盐为原料，经加工制成的寡糖产品中褐藻酸寡糖含量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

3.1褐藻酸寡糖

由β-D-甘露糖醛酸（Mannuronicacid）和ɑ-L-古罗糖醛酸（Guluronicacid），通过1→4糖苷键连接成的聚合度主要为2-10的寡糖。

3.2褐藻酸寡糖的含量

褐藻酸寡糖占寡糖产品的质量百分比。

第一法羧基转化滴定法

4原理

褐藻酸寡糖分子中单糖残基为C6位含有羧基（C6-OOR）的甘露糖醛酸和古罗糖醛酸，一般情况下R为Na和/或H。将褐藻酸寡糖用氢氧化钠溶液转化为钠盐后，进行灰化可使单糖残基上的羧酸钠转化成碳酸盐，用盐酸标准溶液进行滴定，通过消耗的盐酸摩尔数可计算褐藻酸寡糖的含量。

5试剂及仪器

5.1试剂

5.1.1氢氧化钠（NaoH）：分析纯。

5.1.2盐酸标准溶液（HCl，0.01mol/L）：分析纯。

5.1.3甲基橙指示剂（C14H14N3SO3Na）：分析纯。

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5.1.4纯水：符合GB/T6682规定的二级水。

5.2仪器

5.2.1真空干燥箱。

5.2.2分析天平：感量0.0001g。

5.2.3pH计。

5.2.4电子调温万用电炉。

5.2.5高温炉。

6操作方法

6.1转化

称取恒重后的褐藻酸寡糖样品500mg（精确至1mg）（m1）于坩埚中，用20mL纯水溶解后，使用0.5mol/L氢氧化钠溶液将样品溶液pH调至10。待溶液pH稳定后，再使用0.2mol/L盐酸溶液将样品溶液pH调至8.0。

6.2炭化

待6.1步骤中溶液pH稳定至8.0后，置电子调温万用电炉上缓慢加热蒸干（需避免温度过高和溶液喷溅），炭化，得到黑色炭化物。

6.3灰化

将含有炭化物的坩埚转入高温炉中，在650℃±25℃下灰化4小时。灰化结束后冷却至室温，将灰化物用煮沸冷却至室温的纯水溶解，定容至1000mL。

6.4滴定

准确量取50.0mL灰化物溶液于250mL三角瓶中，加入甲基橙溶液5-6滴，用0.01mol/L（c1）盐酸标准溶液滴定到溶液由黄色突变为橙色（滴定至溶液pH为4.0)，记录消耗盐酸标准溶液的毫升数为V。

7计算方法

褐藻酸寡糖的含量按式（1）进行计算

褐藻酸寡糖含量（%）二c1×1000×100%...................（1）

式中：

c1——盐酸标准溶液浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；

V——盐酸标准溶液滴定消耗体积，单位为毫升（mL）；

m1——待测样品取样量，单位为毫克（mg）；

1000——灰化物定容体积，单位为毫升（mL）；

50——灰化物定容液分析取样体积，单位为毫升（mL）；

198——褐藻酸寡糖钠单糖残基的平均相对分子质量，单位为克每摩尔（g/mol）

8精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的5%。

第二法分光光度法

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9原理

褐藻酸寡糖在浓硫酸作用下加热水解脱羧，生成糠醛或糠醛衍生物，可与咔唑发生缩合反应生成紫红色化合物。该类化合物在530nm左右有最大吸收，在一定范围内，吸光度值与糖醛酸浓度呈线性关系。

10试剂及配制

10.1试剂

10.1.1浓硫酸（H2SO4）：优级纯。

10.1.2十水合四硼酸钠（硼砂.Na2B4O7·10H2O）：分析纯。

10.1.3咔唑(C12H9N)：分析纯。

10.1.4褐藻酸钠对照品（SodiumAlginate）：≥98%。

10.1.5纯水：符合GB/T6682规定的二级水。

10.1.6无水乙醇（C2H6O）：分析纯。

10.2试剂配制

10.2.1褐藻酸钠对照品溶液（0.1mg/mL）：精密称取烘干至恒重的褐藻酸钠对照品50mg（精确到0.1mg），用适量纯水溶解，充分溶胀至溶液澄清透亮，定容至500mL，即得。

10.2.2硫酸-硼砂溶液：称取硼砂3.6g，加入纯水40mL，浓硫酸36