《益生菌活菌计数及代谢活力检测拉曼光谱法》编制说明.docx

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《益生菌活菌计数及活性检测拉曼光谱法》标准编制说明

一、制定标准的背景介绍

2001年联合国粮食及农业组织和世界卫生组织（FAO/WHO）提出，当摄入足够数量时，对宿主产生健康益处的活性微生物称之为益生菌[1]。国际益生菌和益生元科学协会（ISAPP）2021年对发酵食品定义为：通过所需的微生物生长和食品成分的酶转化而制成的食品。其中特别指出，当发酵食品中含有确切的活益生菌时，才能标注“含有益生菌”，并认为改善食品营养、调节人体免疫和肠道菌群、含有影响肠道和机体功能的生物活性物质等，是其促进健康的潜在机制[2]。近年来，随着益生菌概念的流行，益生菌的产品线已经从饮食补充剂扩展到临床治疗[3-6]。对于益生菌，不同菌株的活细胞数是否符合标准是公众主要关心的问题。但是，由于国内益生菌行业长期缺乏产品标准规范，导致益生菌产品质量良莠不齐，许多商品的说明书上并未标注关于所含益生菌菌株的功效和产品中实际存在的活细胞数量(菌落形成单位[CFU/毫升])[7,8]。因此，为规范愈发庞大的益生菌市场，避免益生菌产品市场规模不断扩大而出现的虚假夸大宣传等乱象，对商业益生菌产品进行包括快速活菌计数、原位活力测试在

内的定性和定量评价的检测方法迫在眉睫。

然而，目前行业中广泛应用的方法有很大的局限性。对于益生菌产品的活菌计

数、活性检测等质检工作存在检测周期长、成本昂贵、混合益生菌产品检测效果差等

问题[9,10]。为提高益生菌产品的质量检测能力，本标准提出了拉曼光谱检测方法，

对益生菌产品的活细胞数和原位活力进行测定。该方法能够准确测定益生菌产品中的活菌数和活性指标。该方法的建立为今后丰富我国益生菌产品的质控工作打下了一个良好的基础，并为制定中国自己的益生菌标签法律法规以及检测方法提供可靠的数据

保障。

二、标准制定原则和依据

我国目前对益生菌活菌计数及活性检测方法研究还处于初级阶段，有很大的局限

性，有关测定方法的文献报道比较少，主要是色谱法和微生物法。

参考文献Mondol等人研究表明可以基于拉曼检测细胞活力，成功预测混合样品

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中活菌占比，采用拉曼光谱法，经过大量的实验，建立了《益生菌活菌计数及活性检

测拉曼光谱法》[11]。

本标准的建立不仅弥补了我国益生菌行业质控方法的空白，同时对益生菌活菌计数及活性检测的标准检测方法进行了补充，很好的解决了益生菌行业长期缺乏产品标

准规范，导致益生菌产品质量良莠不齐的问题。

三、起草过程

1.2021年10月，青岛生物能源与过程研究所单细胞中心承担的国家重大科学仪器研制、国家重点研发计划等项目中，计划基于单细胞拉曼技术建立益生菌产品质检方

法。

2.2022年3月对方法标准申请立项，同月成立标准起草工作组，主要由青岛生物能源与过程研究所单细胞中心、中国计量科学研究院、中国食品发酵工业研究院、青岛东

海药业和青岛星赛生物组成。

3.2022年6月标准起草工作小组召开第一次工作组会议并共同制定工作计划，包括分工、调研相关资料、安排试验内容，确定了起草原则、标准适用范围、试验方案以及验证方法准确性等标准所要求的试验内容。标准主要是益生菌活菌数和原位活力测定

方法研究，以益生菌固体饮料等常见保健食品为主要目标。

4.2023年6月，成立“益生菌单细胞技术联盟（A-STEP）?,由青岛能源所、中国食品发酵工业研究院、热心肠研究院、星赛生物等联合发起，联盟成员单位有中国计量学

会生物计量专委会、江南大学、内蒙古农业大学、伊利集团、蒙牛集团、中粮营养健

康研究院有限公司、东海药业、青岛啤酒、国际香精香料公司IFF、诺维信

OneHealth、帝斯曼康萃乐、科拓生物、锦旗生物、恒天然、华大基因等。

5.2023年10月，工作小组计划组织标准全国范围内的征求意见。总计向包括省、自治区、直辖市质量技术监督局，科研院所，益生菌产业领军企业的等20家以上单位征

询意见。

四、标准主要条款的说明

1.本标准分为6个部分：范围、规范性引用文件、术语和定义、试剂或材料、仪器设

备、检验要求和方法。

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2.针对我国益生菌产品中添加各菌种的活菌数量情况，本文件适用于添加以下一种或多种菌种的益生菌产品活菌计数及代谢活力检测，包括植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、格氏乳杆菌、卷曲乳杆菌、乳双歧杆菌

和长双歧杆菌。

五、工作内容及主要试验

本方法分样品预处理、样品重水（D2O）孵育、自动化采集单细胞拉曼图谱三大

步骤。进行了方法的准确度、方法的应用实例和方法的适用性等实验。

1.样品预处理

分别用单一菌株益生菌产品MPP-A作为测试样