SN 1470-2004国境口岸登革热检验规程.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T1470—2004

国境口岸登革热检验规程

Examinationcodesfordenguefeveratfrontierport

2004-11-17发布

2005-04-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

I

SN/T1470—2004

前言

本标准的附录A、附录B均为资料性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检

疫局。

本标准主要起草人：熊国欢、赖天然、陈莉莉、梁军、关淳、刘云凯。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

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SN/T1470—2004

国境口岸登革热检验规程

1范围

本标准规定了国境口岸登革热的检验对象、程序和结果处置。

本标准适用于国境口岸人群登革热的检验。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

WS233—2002微生物和生物医学实验室生物安全通用准则

3检验对象

3.1国境口岸发现的登革热病人、疑似登革热病人和疑似登革热死亡病例。

3.2其他申请检验的人员。

4实验室生物安全防护

实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备及个体防护应符合WS233—2002中二级生物安全防

护实验室的要求。

5标本采集、处理和保存

5.1标本采集和处理

5.1.1登革热病人、疑似登革热病人及其他人员

采集发病后5d内静脉血3mL,置室温使其凝固，3000r/min离心15min,吸取上层血清进行检测。病毒分离应使用当天血清。对污染的血清要先加青霉素、链霉素(最终浓度各为500kU/L),4℃作用2h处理后接种。接种后余下的血清为早期血清。无菌采集病后3周的血液标本，同上处理，作为恢

复期血清，供血清学检测用。

5.1.2疑似登革热死亡病例

可取血液、脑脊液、脑组织、肝组织等。血液、脑脊液处理同5.1.1。组织块研磨制成悬液，3000r/min

离心15min,取上清液进行检测。

5.2送检标本要求

5.2.1送检标本的标识应与送检单、化验单的记录相符。

5.2.2送检标本的容器应无破损、渗漏。

5.2.3血液标本宜无溶血、血脂过多以及黄疸。

5.2.4远程送检标本应冷藏运输。

5.3标本保存

分离的血清如不能即时进行检测，可在如下条件下保存：

——在3d内检测的，可放置2℃~8℃保存；

短期贮存可在-20℃以下保存；

长期贮存应在一70℃以下保存；

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——血清应避免反复冻融。

6实验室检测

6.1血清学检测

参见附录A。

6.2病原学检测

参见附录B。

7阳性结果处置

7.1血清学检测结果阳性或可疑阳性的标本，宜选择其他检测方法进行复检。

7.2病毒分离株及RT-PCR检测结果阳性的标本，应送有资质的实验室复检、鉴定。

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附录A

(资料性附录)

血清学检测

A.1应用捕捉ELISA法检测IgM抗体

A.1.1材料

常用的材料及其制备：

——96孔聚苯乙烯V型或U型塑料板、酶标仪；

——10pL～100μL可调加样器、10mL吸管；

——抗人IgM(μ链)单克隆抗体(简称抗人μ链);

抗原：病毒接种C6/36白纹伊蚊传代细胞，病变达“土十+”,冻融三次，用波长14kHz

22kHz超声波粉碎三次，每次30s,3000r/min离心15min,上清即为抗原。以C6/36白纹伊蚊传代细胞培养的各型登革病毒为阳性抗原，以未接种病毒的正常C6/36白纹伊蚊传代细

胞为阴性抗原；

—抗IgM阴性或阳性对照血清；

——辣根过氧化物酶标化登革病毒1型～4型单克隆抗体；

——缓冲液：

●洗涤液：0.05%吐温-20

●稀释液：10%牛血清

●封闭液：1%牛血清白蛋白

pH7.4pH7.4

pH9.6

磷酸缓冲液；

磷酸缓冲液；

碳酸缓冲液；

——底物：邻苯二胺(OPD)溶液(制备：pH5.0磷酸盐柠檬酸盐缓冲液100mL,OPD40mg,30%

双氧水0.15mL,临用前按需配