3.2 基因工程的基本操作程序课件-高二下学期生物人教版选择性必修3(1).pptx

3.2基因工程的基本操作程序;;;4、是不是每培育一株转基因抗虫棉都要从苏云金杆菌中提取Bt基因，还有没有其它方法可以快速大量获得呢？;目的基因的mRNA;碱基互补配对原则;【相关信息】

引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸;耐高温的DNA聚合酶

;3’;第一轮循环的产物作为第二轮反应的模板，经过变性、复性和延伸三步产生第二轮循环的产物；;2.利用PCR既可以快速扩增特定基因，也可以检测基因的表达。下列有关PCR的叙述错误的是(）

A.PCR用的DNA聚合酶是一种耐高温酶

B.变性过程中双链DNA的解开不需要解旋酶

C.复性过程中引物与模板链的结合遵循碱基互补配对原则

D.延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP和4种核糖核苷酸;下列有关PCR的叙述,正确的是()

A.作为模板的DNA序列不能在每次扩增中重复使用

B.作为引物的脱氧核苷酸序列不能在每次扩增中重复使用

C.反应需要的DNA聚合酶不能在每次扩增中重复使用

D.反应需要的DNA连接酶不能在每次扩增中重复使用;【P79旁栏思考】用PCR可以扩增mRNA吗？;基因工程基本操作步骤：;思考：能不能把Bt基因（目的基因）直接“转到”棉花（受体细胞）里？;辨析：“启动子与终止子”和“起始密码子与终止密码子”;限制酶;限制酶;学案P48典例剖析、学以致用;3、如果用一种限制酶分别切割目的基因和质粒，

再用DNA连接酶处理后会出现几种产物？

(只考虑两两结合);双酶切法;2.下图是利用基因工程技术培育转基因植物,生产可口服的疫苗的部分过程示意图,其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制酶。下列说法错误的是()

;基因工程基本操作步骤：;1、将目的基因导入受体细胞的方法有哪些？（阅读书本P80-82）;花粉管通道法：;农杆菌转化法的过程;基因枪法意图;1.显微注射法;Ca2+处理法;学案P49典例剖析;基因表达载体构建;不一定！;转Bt基因;1.分子水平的检测;2.检测目的基因是否转录出了mRNA;3.检测目的基因是否翻译成蛋白质;检测受体的染色体DNA上是否插入了目的基因;;转Bt基因;类型;基因工程基本操作步骤：;4.下列基因工程的操作步骤中,未发生碱基互补配对的是()

A.人工条件下以mRNA为模板逆转录合成目的基因

B.目的基因与质粒结合

C.重组质粒导入受体细胞

D.目的基因的表达

;练习与应用;二、拓展应用

2.八氢番茄红素合酶（其基因用psy表示）和胡萝卜素脱饱和酶（其基因用crtI表示）参与β-胡萝卜素的合成。pmi为磷酸甘露醇异构酶基因，它编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长。科学家将psy和crtI基因转入水稻，使水稻胚乳中富含β-胡萝卜素，由此生产出的大米称为"黄金大米"。请根据以上信息回答下列问题。

（1）科学家在培育"黄金大米"时，将crtl和psy基因导入含pmi基因的质粒中，构建了质粒pSYN12424。该项研究的目的基因是______________________，

标记基因是____________，质粒pSYN12424的作用是________________________。

;（2）在构建质粒载体时，目的基因序列中能否含有用到的限制酶的识别序列?为什么?;抗虫棉产生的Bt抗虫蛋白对人畜有毒害么？【书本P77相关信息】;1.在实际种植过程中，棉铃虫是否对转Bt基因的抗虫棉产生了严重的抗性？证据是什么？;2.科研工作者在没有发现棉铃虫出现抗性之前，就应该想办法应对。他们想出的延缓棉铃虫对Bt抗虫蛋白产生抗性的措施有哪些？这些措施的原理是什么？有效吗？;二、拓展应用

1.研究人员在研究转基因烟草中外源卡那霉素抗性基因的遗传稳定性时，发现44株转基因烟草中有4株该基因的遗传不符合孟德尔遗传规律，在它们的自交后代中出现了较多的没有卡那霉素抗性的植株。请查找相关资料，尝试对这个问题作出解释。;1.实验原理;（2）DNA片段电泳鉴定的原理;2.材料用具;10倍浓缩的扩增缓冲液（含Mg2+）;3.方法步骤;（2）DNA片段的电泳鉴定;④电泳;（2）DNA片段的电泳鉴定;①为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌处理。

②该实验所需材料可以直接从公司购买，缓冲液和酶应分装成小份，并在-20℃储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化

③在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。

④在进行操作时，一定要戴好一次性手套。

⑤PCR扩增不能随意加大试剂用量。;4.结果分析与评价(书本p85）;用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱，其中1号为DNA标准样液(Marker