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高中生物常用的菌种的筛选方法

高中生物常用的菌种的筛选方法

〔1〕施加选择性压力分开法

主要是利用不同种类的微生物其生长繁殖对环境和营养的要求不同，如温度、pH、渗透压、氧气、碳源、氮源等，人为控制这些条件，使之利于某类或某种微生物生长，而不利于其他种类微生物的生存，以达到使目的菌种占优势。而得以快速分开纯化的目的。如可以控制培养时的氧，可将好氧微生物和厌氧微生物分开；通过控制温度，可将嗜热微生物和非嗜热微生物分开；控制pH，可将嗜酸、嗜碱微生物分开等。在分开培养基中也可以加入不同的抗生素或试剂来增加选择性。如在分开放线菌和细菌时，可加入抗真菌抗生素；分开真菌时，可加入抗细菌药物。

〔2〕随机分开方法

有些微生物的产物对筛选没有直接的选择性指示作用，因此常采纳随机分开方法分开。

A、抗生素产生菌的分开抗生素产生菌的分开常用抑菌圈法。实验必必需用工具菌：采纳抗生素的敏感菌，传统上常用金黄色葡萄球菌和枯草杆菌。

B、抗肿瘤药物产生菌的分开抗肿瘤药物产生菌的分开常用方法：生化诱导法、SOS生色检测法、DNA修复能力突变株。原理是利用DNA的损伤，微生物发生突变。B1、生化诱导法：将大肠杆菌的lacZ基因连接在λ噬菌体的PL启动子下，当DNA损伤时，诱发λ阻遏物CI分解，PL启动子启动lacZ基因转录，测定表达的?-半乳糖苷酶活性，来检测药物的存在。B2、SOS生色检测法：利用当DNA损伤时，可活化yecA蛋白，进而分解噬菌体的阻遏蛋白，再引起sifA基因启动lacZ基因转录，测定表达的?-半乳糖苷酶活性，来检测药物的存在。

C、生长因子产生菌的分开以氨基酸产生菌为例，介绍筛选方法。首先将待试菌接入加了抗真菌的化合物〔如亚胺环己酮〕的分开培养基中生长，然后采纳影印法，将菌落复印到能支持氨基酸产生菌生长的培养基中，培养2-3天后，用紫外线杀司长好的菌落，再往此平板上面铺一层相应营养缺陷型菌株菌悬液，培养16小时后，被杀死的氨基酸产生菌的菌落四周应有一检测菌的生长圈。

〔3〕目的微生物分开

A、依据形态筛选突变株

B、依据平板菌落生化反应筛选变株透明圈法、呈色圈法、抑菌圈法、浑浊圈法等。

①透明圈法：在平板培养基中加入溶解性较差的底物，使培养基混浊。能分解底物的微生物便会在菌落四周产生透明圈，圈的大小初步反应该菌株利用底物的能力。该法在分开水解酶产生菌时采纳较多，如脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶、核酸酶产生菌都会在含有底物的选择性培养基平板上形成肉眼可见的透明圈。在分开某种产生有机酸的菌株时，也通常采纳透明圈法进行初筛。在选择性培养基中加入碳酸钙，使平板成混状，将样品悬浮液涂抹到平板上进行培养，由于产生菌能够把菌落四周的碳酸钙水解，形成清楚的透明圈，可以轻易地鉴别出来。分开乳酸产生菌时，由于乳酸是一种较强的有机酸，因此，在培养基中加入的碳酸钙不仅有鉴别作用，还有酸中和作用。

②变色圈法：关于一些不易产生透明圈产物的产生菌，可在底物平板中加入指示剂或显色剂，使所必需微生物能被快速鉴别出来。如筛选果胶酶产生菌时，用含0.2%果胶为惟一碳源的培养基平板，对含微生物样品进行分开，待菌落长成后，加入0.2%刚果红溶液染色4h，具有分解果胶能力的菌落四周便会出现绛红色水解圈。在分开谷氨酸产生菌时，可在培养基中加入溴百里酚蓝，它是一种酸碱指示剂，变色范围在pH6.2～7.6，当pH在6.2以下时为黄色，pH7.6以上为蓝色。假设平板上出现产酸菌，其菌落四周会变成黄色，可以从这些产酸菌中筛选谷氨酸产生菌。③生长圈法：生长圈法通常用于分开筛选氨基酸、核苷酸和维生素的产生菌。工具菌是一些相对应的营养缺陷型菌株。将待检菌涂布于含高浓度的工具菌并缺少所必需营养物的平板上进行培养，假设某菌株能合成平板所必需的营养物，在该菌株的菌落四周便会形成一个混浊的生长圈。如嘌呤营养缺陷型大肠杆菌〔如E.coliP264〕与不含嘌呤的琼脂混合倒平板，在其上涂布含菌样品保温培养，四周出现生长圈的菌落即为嘌呤产生菌。④抑菌圈法：常用于抗生素产生菌的分开筛选，工具菌采纳抗生素的敏感菌。假设被检菌能分泌某些抑制菌生长的物质，如抗生素等，便会在该菌落四周形成工具菌不能生长的抑菌圈，很容易被鉴别出来。