(8)--008 DNA测序技术身边的生物化学.ppt

2.DNA测序技术类型及原理2.2第2代测序技术焦磷酸测序（Roche/454测序技术）合成测序（Illumina/Solexa测序技术）连接测序（ABI/SOLiD测序技术）第2代测序：合成测序法2.DNA测序技术类型及原理2.2第二代测序技术2.DNA测序技术类型及原理DNA测序技术发展2.DNA测序技术类型及原理2.3第3代测序技术Helicos公司的Heliscope单分子测序PacificBiosciences公司的SMRT测序OxfordNanoporeTechnologies公司的纳米孔单分子技术第3代测序：单分子测序技术PrimerPolymerase2.DNA测序技术类型及原理2.3第3代测序技术第3代单分子实时测序原理3.DNA测序技术类型及原理MethodReadlength(bp)SinglepasserrorrateNo.readsperrunTimeperrunCostperMB第一代Sanger测序600–10000.001%960.5–3h$500第二代454(Roche)GSFLX+测序7001%1×10623h$8.57第二代IlluminaHiSeq2500测序2×1250.1%8×109(paired)7–60h$0.03第三代PacBioRSII:P6-C4测序Avg.10–15k13%3.5–7.5×1040.5–4h$0.40–0.803.DNA测序技术的应用随着新的测序技术的出现,大规模测序的成本迅速下降,花费1000美元测一个人的基因组的目标相信很快就可以实现。届时,对于遗传病的诊治将变得简单、快速,并能从基因组水平上指导个人的医疗和保健,从而进入个人化医疗的时代。4.小结关键知识点：1.Sanger链末端终止法测序原理2.合成测序原理3.单分子实时测序原理4.DNA测序技术应用DNA测序技术发展大事记：1954年,Whitfeld等就提出了测定多聚核糖核苷酸链的降解法。1977年,Sanger等发明了双脱氧核苷酸末端终止测序法，Gilbert等发明了化学降解法测定DNA序列因此共获得诺贝尔化学奖。1987年,第一台荧光自动测序仪：AB370诞生。1996年,第一台毛细管电泳测序仪：AB310诞生。2005年,第二代高通量测序仪,454(Roche)GSFLX+测序。2006年,第二代高通量测序仪,Solexa/IlluminaHiSeq2500测序。2007年,第二代高通量测序仪,LifeTechnologies/SOLID测序。2011年,第三代高通量测序仪,PacificBiosciencesPacBioRS测序。2012年,第三代高通量测序仪,OxfordNanoporeTechnologiesMinION测序。同学们大家好，今天给大家介绍的是DNA测序技术。*一提到DNA测序，大家可能会联想到“人类基因组计划”。这个测序计划是由美国、中国在内的6个国家花费了尽11年时间，耗资30亿美元而完成的。通过DNA测序，我们获得了组成人体25000个基因的30亿个碱基对的排列顺序。*随后，海量物种的遗传信息也相继被揭秘，比如，线虫、拟南芥、水稻、家蚕、熊猫等等。之前，需要11年，耗资30亿美元才能获得的人类基因组图谱，现在只需要1周，花费1万美元，也就是大约7万人民币就可以获得一个人基因组的精确测序。*那么这一切都归功于DNA测序技术的发展。早在1954年就已经出现了早期DNA测序技术的报道，此后发展至今六十多年时间，陆续产生了以双脱氧末端终止法为代表的第一代测序技术，以合成测序法为主的第二代测序技术，和以单分子测序为标志的第三代测序技术。在这里我们对当前的三代DNA测序技术及原理做一简单总结。*首先我们来总结一下第一代测序技术。第一代测序技术主要包括：sanger双脱氧末端终止法、Gilbert化学裂解法，荧光自动测序法和杂交测序法。其中，sanger双脱氧末端终止法是第一代测序技术的典型代表，sanger也因此获得了1980年的诺贝尔化学奖。那么下面我们就以链末端终