食品中病原微生物检验技术—食品中金黄色葡萄球菌检验技术（食品微生物检验课件）.pptx

金黄色葡萄球菌概述;目录;金黄色葡萄球菌（多为致病菌）;;;;典型的金黄色葡萄球菌为球型，显微镜下排列成葡萄串状，革兰氏阳性、无芽孢、无荚膜。血平板菌落周围形成透明的溶血环。B-P平板上颜色成灰色到黑色，边缘常为单色，周围为一浑浊带，在其外边缘常有一透明圈。;金黄色葡萄球菌MPN计数;目录;;样品的稀释：以无菌操作，将检样25g（或25mL）剪碎研磨后，放于225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水中，均质或震荡混匀。吸取上述1:10混悬液，进行10倍递增稀释。;接种：根据样品污染情况，选择3个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别接种1mL样品匀液至7.5%氯化钠肉汤管（如接种量超过1mL，则用双料7.5%氯化钠肉汤），每个稀释度接种3管，于36±1℃培养18h～24h。;接种平皿：用接种环从培养后7.5%氯化钠肉汤管中分别取培养物1环，移种于Baird-Parke平板，于36±1℃培养24h～48h。;Baird-Parke平板上的金黄色葡萄球菌落

圆形、表面光滑、凸起、湿润、菌落直径2mm-3mm。

颜色呈灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（非白色）的边缘，周围绕以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带。;

从典型菌落中至少选5个可疑菌落（小于5个全选）进行鉴定试验。分别做染色镜检、血浆凝固酶实验；同时划线接种到血平板于36±1℃培养18h～24h后观察菌落形态。

;金黄色葡萄球菌定性检验;目录;;;増菌：以无菌操作，将检样25g（或25mL）剪碎研磨后，放于225mL7.5%氯化钠肉汤培养基内，均质或震荡混匀。36℃±1℃，培养18-24h。肉汤呈浑浊生长。;分离：増菌后的培养物，分别划线接种到Baird-Parke平板和血平板。

血平板：36℃±1℃，培养18-24h；

Baird-Parke平板：36℃±1℃，培养24-48h。;Baird-Parke平板上的金黄色葡萄球菌落

圆形、表面光滑、凸起、湿润、菌落直径2mm-3mm。

颜色呈灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（非白色）的边缘，周围绕以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带。;血平板上的金黄色葡萄球菌落

菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润。

金黄色，有时为白色，菌落周围可见完全透明溶血圈。;金黄色葡萄球菌平板计数;目录;;样品的稀释：以无菌操作，将检样25g（或25mL）剪碎???磨后，放于225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水中，均质或震荡混匀。吸取上述1:10混悬液，进行10倍递增稀释。;接种和培养：根据样品污染情况，选择2-3个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液以0.3mL、0.3mL、0.4mL接种量分别加入3块B-P平板，然后用灭菌棒涂布整个平板，水分蒸发后置于36±1℃培养。;Baird-Parke平板上的金黄色葡萄球菌落

圆形、表面光滑、凸起、湿润、菌落直径2mm-3mm。

颜色呈灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（非白色）的边缘，周围绕以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带。;计数：选择有典型的金黄色葡萄球菌菌落的平板，且同一稀释度的3个平板所有菌落数合计在20CFU～200CFU之间的平板，计数典型菌落数。;

确证鉴定：

从典型菌落中至少选5个可疑菌落（小于5个全选）进行鉴定试验。分别做染色镜检和血浆凝固酶试验；同时划线接种到血平板36±1℃培养18h～24h后观察菌落形态，金黄色葡萄球菌菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。

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