紫外可见分光光度法（食品仪器分析课件）.pptx

光的性质;紫外—可见分光光度法是利用物质对紫

外—可见光的吸收特征和吸收强度，对物质

进行定性和定量分析的一种仪器分析方法。

特点：灵敏度和准确度较高，仪器设备简

单，操作方便，应用广泛等。;一、光的波动性

光是一种电磁波，电磁波可以用周期T(s)、频率?(Hz)、波长λ(nm)和波数σ（cm-1）等参数描述。它们之间的关系为：

?=1/T=c/λ

σ=1/λ=?/c

;波谱区名称

;二、光的粒子性

光具有粒子性，光是由光子组成的，光子具有能量，其能量与频率或波长的关系为：

E=h?=h·c/λ

h=6.626x10-34J·s;三、单色光、复合光和互补色光

同一波长的光称单色光，由不同波长组成的光称复合光。物质有色是因其分子对不同波长的光选择性吸收而产生。下表列出颜色与吸收光之间的关系。其中对应颜色的光称互补色光。

;不同颜色的可见光波长及其互补光;蓝;光谱吸收曲线;一、紫外-可见吸收光谱产生的机理

光子作用于物质分子时，如果光子的能量与物质分子的电子能级间的能级差满足

△E=h?

光子将能量传递给物质分子，分子获得能量可发生电子能级的跃迁。在光吸收过程中基于分子中电子能级的跃迁而产生的光谱，称为紫外-可见吸收光谱（或电子光谱）。;二、吸收曲线;三、吸收曲线的特征

1.同一种吸光物质对不同波长的光吸收程度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长λmax。

吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。

2.同一种物质浓度不同，其吸收曲线形状相似λmax不变。

在λmax处，吸光度A正比于浓度C。测定最灵敏。;3.不同物质吸收曲线的特性不同。

吸收曲线的特性包括曲线的形状、峰的数目、峰的位置和峰的强度等。它们与物质特性有关，吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为物质定性分析的依据之一。;物质对光的选择性吸收;一、光的吸收

物质粒子如原子、分子、离子等总是处于特定的不连续的能量状态，各状态对应的能量称为能级，用E表示。基态E0，激发态Ej

EL=h?=△E(能级差);二、物质颜??的产生

;一种物质呈现何种颜色，与入射光组成和物质本身的结构有关,而溶液呈现不同的颜色是由于溶液中的吸光质点(离子或分子)选择性地吸收某种颜色的光而引起的。;②如果入射光全部透过（不吸收），则溶液无色透明。;③如果对某种色光产生选择性吸收，则溶液呈现透射光的颜色，即溶液呈现的是它吸收光的互补色光的颜色。如硫酸铜溶液选择性地吸收了白色光中的黄色光，所以呈现蓝色。;朗伯-比尔定律;当一束平行单色光，通过一均匀的溶液后，光的强度会减弱。;透光度T（透射比）Transmittance;当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即

A=κbc

式中比例常数κ与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。K可用a（吸光系数）或ε（摩尔吸光系数）表示。c为吸光物质浓度，b为透光液层厚度。

朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法的理论基础。;朗伯和比尔分别研究了吸光度与液层厚度和吸光度与浓度之间的定量关系，合称朗伯-比尔定律，其数学表达式为：;比例常数的取值与浓度的单位有关;摩尔吸光系数的物理意义：

溶液浓度为1mol/L、液层厚度为1cm时物质对光的吸收程度

（1）吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数

（2）不随浓度c和液层厚度b的改变而改变。

在温度和波长等条件一定时，ε仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物浓度无关；

（3）同一吸光物质在不同波长下的ε值是不同的。在最大吸收波长λmax处的摩尔吸光系数，常以εmax表示

εmax表明了该吸收物质最大限度的吸光能力。;四、朗伯-比尔定律的应用条件

朗伯-比尔定律不仅适用于紫外光、可见光，也适用红外光；在同一波长下，各组分吸光度具有加和性

A=A1+A2+??+An

（1）入射光必须为单色光

（2）被测样品必须是均匀介质

（3）在吸收过程中吸收物质之间不能发生相

互作用。;偏离朗伯一比尔定律的原因;定量分析时，通常液层厚度是相同的，按照比尔定律，浓度与吸光度之间的关系应该是一条通过直角坐标原点的直